Čisto ulje Saposhnikovia divaricata za proizvodnju svijeća i sapuna veleprodajno eterično ulje difuzora novo za difuzore s trskom

kratak opis:

 

2.1. Priprema SDE

Rizomi SD su kupljeni kao sušena biljka od Hanherb Co. (Guri, Koreja). Biljni materijal je taksonomski potvrdio dr. Go-Ya Choi sa Korejskog instituta za orijentalnu medicinu (KIOM). Uzorak vaučera (broj 2014 SDE-6) deponovan je u Korejski herbarijum standardnih biljnih resursa. Osušeni rizomi SD (320 g) ekstrahovani su dva puta sa 70% etanolom (sa refluksom od 2 sata) i ekstrakt je zatim koncentrisan pod sniženim pritiskom. Dekocija je filtrirana, liofilizirana i čuvana na 4°C. Prinos osušenog ekstrakta iz sirovih polaznih materijala iznosio je 48,13% (w/w).

 

2.2. Kvantitativna tečna hromatografija visokih performansi (HPLC) analiza

Kromatografska analiza je izvedena sa HPLC sistemom (Waters Co., Milford, MA, USA) i detektorom fotodiodnog niza. Za HPLC analizu SDE, prim-O-glukozilcimifugin standard je kupljen od Korea Promotion Institute for Traditional Medicine Industry (Gyeongsan, Koreja), isec-O-glukozilamaudol i 4′-O-β-D-glukozil-5-O-metilvisaminol izolovani su u našoj laboratoriji i identifikovani spektralnim analizama, prvenstveno NMR i MS.

SDE uzorci (0,1 mg) rastvoreni su u 70% etanolu (10 mL). Kromatografsko odvajanje je izvedeno sa XSelect HSS T3 C18 kolonom (4,6 × 250 mm, 5μm, Waters Co., Milford, MA, SAD). Mobilna faza se sastojala od acetonitrila (A) i 0,1% sirćetne kiseline u vodi (B) pri brzini protoka od 1,0 mL/min. Korišten je višestepeni program gradijenta na sljedeći način: 5% A (0 min), 5–20% A (0–10 min), 20% A (10–23 min) i 20–65% A (23–40 min ). Talasna dužina detekcije je skenirana na 210–400 nm i snimljena na 254 nm. Zapremina injekcije je bila 10,0μL. Standardni rastvori za određivanje tri hromona pripremljeni su u konačnoj koncentraciji od 7,781 mg/mL (prim-O-glukozilcimifugin), 31,125 mg/mL (4′-O-β-D-glukozil-5-O-metilvisaminol) i 31,125 mg/mL (sec-O-glukozilhamaudol) u metanolu i čuva se na 4°C.

2.3. Evaluacija antiinflamatorne aktivnostiIn Vitro

2.3.1. Ćelijska kultura i tretman uzoraka

RAW 264,7 ćelije su dobijene iz American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, SAD) i uzgajane u DMEM medijumu koji sadrži 1% antibiotika i 5,5% FBS. Ćelije su inkubirane u vlažnoj atmosferi od 5% CO2 na 37°C. Da bi se stimulirale ćelije, medij je zamijenjen svježim DMEM medijumom i lipopolisaharidom (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, USA) na 1μg/mL je dodan u prisustvu ili odsustvu SDE (200 ili 400μg/mL) dodatnih 24 h.

2.3.2. Određivanje azotnog oksida (NO), prostaglandina E2 (PGE2), faktora tumorske nekroze-α(TNF-α), i proizvodnja interleukina-6 (IL-6).

Ćelije su tretirane sa SDE i stimulisane sa LPS tokom 24 h. Proizvodnja NO analizirana je mjerenjem nitrita korištenjem Griessovog reagensa prema prethodnoj studiji [12]. Lučenje inflamatornih citokina PGE2, TNF-α, a IL-6 je određen korištenjem ELISA kompleta (R&D sistemi) prema uputama proizvođača. Efekti SDE na proizvodnju NO i citokina određeni su na 540 nm ili 450 nm koristeći Wallac EnVision™čitač mikropločica (PerkinElmer).

2.4. Evaluacija antiosteoartritisne aktivnostiIn Vivo

2.4.1. Životinje

Mužjaci Sprague-Dawley pacova (stari 7 sedmica) kupljeni su od Samtako Inc. (Osan, Koreja) i smješteni u kontroliranim uvjetima sa 12-satnim ciklusom svjetlo/mrak na°C i% vlažnosti. Pacovi su dobili laboratorijsku ishranu i voduad libitum. Sve eksperimentalne procedure izvedene su u skladu sa smjernicama Nacionalnog instituta za zdravlje (NIH) i odobrene od strane Komiteta za njegu i korištenje životinja na univerzitetu Daejeon (Daejeon, Republika Koreja).

2.4.2. Indukcija OA sa MIA kod pacova

Životinje su randomizirane i raspoređene u tretirane grupe prije početka studije (po grupi). MIA rastvor (3 mg/50μL 0,9% fiziološkog rastvora) direktno je ubrizgan u intraartikularni prostor desnog kolena pod anestezijom indukovanom mešavinom ketamina i ksilazina. Štakori su nasumično podijeljeni u četiri grupe: (1) grupa fiziološkog rastvora bez injekcije MIA, (2) grupa MIA sa injekcijom MIA, (3) grupa tretirana SDE (200 mg/kg) sa injekcijom MIA i (4 ) grupa tretirana indometacinom (IM-) (2 mg/kg) sa injekcijom MIA. Pacovima je davan oralno sa SDE i IM 1 nedelju pre injekcije MIA tokom 4 nedelje. Doze SDE i IM korištene u ovoj studiji bile su zasnovane na onima korištenim u prethodnim studijama [10,13,14].

2.4.3. Mjerenja distribucije težine stražnje šape

Nakon indukcije OA, prvobitna ravnoteža u podnošenju težine stražnjih šapa je poremećena. Tester nesposobnosti (Linton instrumentation, Norfolk, UK) korišten je za procjenu promjena u toleranciji na nosivost. Pacovi su pažljivo stavljeni u mernu komoru. Sila nošenja težine koju vrši stražnji ekstremitet je prosječna u periodu od 3 s. Omjer raspodjele težine izračunat je sljedećom jednadžbom: [težina na desnom stražnjem ekstremitetu/(težina na desnom stražnjem ekstremitetu + težina na lijevom stražnjem udu)] × 100 [15].

2.4.4. Mjerenje nivoa citokina u serumu

Uzorci krvi su centrifugirani na 1500 g tokom 10 minuta na 4°C; zatim je serum sakupljen i čuvan na -70°C do upotrebe. Nivoi IL-1β, IL-6, TNF-α, i PGE2 u serumu mjereni su korištenjem ELISA kompleta od R&D Systems (Minneapolis, MN, SAD) prema uputama proizvođača.

2.4.5. Kvantitativna RT-PCR analiza u realnom vremenu

Ukupna RNK je ekstrahirana iz tkiva zgloba koljena pomoću TRI reagensa® (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA), reverzno transkribirana u cDNK i PCR-amplificirana korištenjem TM One Step RT PCR kita sa SYBR zelenom (Applied Biosystems , Grand Island, NY, SAD). Kvantitativna PCR u realnom vremenu izvedena je pomoću Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR sistema (Applied Biosystems, Grand Island, NY, USA). Sekvence prajmera i sekvence sonde prikazane su u tabeli1. Alikvoti uzorka cDNK i jednaka količina GAPDH cDNK su amplificirani TaqMan® Universal PCR master mješavinom koja sadrži DNK polimerazu prema uputama proizvođača (Applied Biosystems, Foster, Kalifornija, SAD). PCR uslovi su bili 2 min na 50°C, 10 min na 94°C, 15 s na 95°C i 1 min na 60°C tokom 40 ciklusa. Koncentracija ciljnog gena određena je uporednom metodom Ct (broj ciklusa praga na tački križanja između grafikona amplifikacije i praga), prema uputama proizvođača.

FOB cijena:US $0,5 - 9,999 / komad

Min. Količina narudžbe:100 komada/komada

Sposobnost nabavke:10000 komada/komada mjesečno