Čisto ulje Saposhnikovia divaricata za izradu svijeća i sapuna, veleprodaja, eterično ulje za difuzore, novo za difuzore s trskom

kratak opis:

 

2.1. Priprema SDE-a

Rizomi SD-a su kupljeni kao sušena biljka od kompanije Hanherb Co. (Guri, Koreja). Biljni materijal je taksonomski potvrdio dr. Go-Ya Choi iz Korejskog instituta za orijentalnu medicinu (KIOM). Uzorak vaučera (broj 2014 SDE-6) je pohranjen u Korejskom herbarijumu standardnih biljnih resursa. Osušeni rizomi SD-a (320 g) su dva puta ekstrahovani sa 70% etanolom (uz 2 sata refluksa), a ekstrakt je zatim koncentrisan pod smanjenim pritiskom. Dekokt je filtriran, liofilizovan i čuvan na 4°C. Prinos osušenog ekstrakta iz sirovih početnih materijala bio je 48,13% (w/w).

 

2.2. Kvantitativna analiza visokoefikasne tečne hromatografije (HPLC)

Kromatografska analiza je provedena HPLC sistemom (Waters Co., Milford, MA, SAD) i detektorom s fotodiodnim nizom. Za HPLC analizu SDE, primarni...O-standard glukozilcimifugina je kupljen od Korejskog instituta za promociju tradicionalne medicine (Gyeongsan, Koreja), isec-O-glukozilhamaudol i 4′-O-β-D-glukozil-5-O-metilvisaminol su izolovani u našoj laboratoriji i identifikovani spektralnim analizama, prvenstveno NMR i MS.

Uzorci SDE (0,1 mg) su rastvoreni u 70% etanolu (10 mL). Kromatografsko odvajanje je izvršeno pomoću XSelect HSS T3 C18 kolone (4,6 × 250 mm, 5μm, Waters Co., Milford, MA, SAD). Mobilna faza se sastojala od acetonitrila (A) i 0,1% sirćetne kiseline u vodi (B) pri brzini protoka od 1,0 mL/min. Korišten je višestepeni gradijentni program na sljedeći način: 5% A (0 min), 5–20% A (0–10 min), 20% A (10–23 min) i 20–65% A (23–40 min). Talasna dužina detekcije skenirana je na 210–400 nm i snimljena na 254 nm. Volumen injekcije bio je 10,0μL. Standardni rastvori za određivanje tri hromona pripremljeni su u konačnoj koncentraciji od 7,781 mg/mL (prim-O-glukozilcimifugin), 31,125 mg/mL (4′-O-β-D-glukozil-5-O-metilvisaminol) i 31,125 mg/mL (sec-O-glukozilhamaudol) u metanolu i čuvan na 4°C.

2.3. Evaluacija protivupalne aktivnostiIn vitro

2.3.1. Kultura ćelija i tretman uzoraka

RAW 264.7 ćelije su dobijene iz Američke kolekcije tipskih kultura (ATCC, Manassas, VA, SAD) i uzgajane u DMEM medijumu koji sadrži 1% antibiotika i 5,5% FBS. Ćelije su inkubirane u vlažnoj atmosferi od 5% CO2 na 37°C. Da bi se stimulisale ćelije, medijum je zamijenjen svježim DMEM medijumom i lipopolisaharidom (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, SAD) na 1μg/mL je dodat u prisustvu ili odsustvu SDE (200 ili 400μg/mL) tokom dodatnih 24 sata.

2.3.2. Određivanje dušikovog oksida (NO), prostaglandina E2 (PGE2), faktora tumorske nekroze-α(TNF-α) i proizvodnju interleukina-6 (IL-6)

Ćelije su tretirane sa SDE i stimulisane sa LPS tokom 24 sata. Produkcija NO je analizirana mjerenjem nitrita korištenjem Griessovog reagensa prema prethodnoj studiji [12]. Sekrecija inflamatornih citokina PGE2, TNF-α, a IL-6 je određen korištenjem ELISA kita (R&D systems) prema uputama proizvođača. Efekti SDE na proizvodnju NO i citokina određeni su na 540 nm ili 450 nm korištenjem Wallac EnVision uređaja.™čitač mikroploča (PerkinElmer).

2.4. Evaluacija antiosteoartritične aktivnostiIn Vivo

2.4.1. Životinje

Mužjaci pacova Sprague-Dawley (stari 7 sedmica) kupljeni su od Samtako Inc. (Osan, Koreja) i smješteni u kontroliranim uvjetima s 12-satnim ciklusom svjetlosti/tame na°C i% vlažnosti. Pacovima je obezbijeđena laboratorijska ishrana i voda.po voljiSvi eksperimentalni postupci su provedeni u skladu sa smjernicama Nacionalnog instituta za zdravlje (NIH) i odobreni od strane Komiteta za njegu i korištenje životinja Univerziteta Daejeon (Daejeon, Republika Koreja).

2.4.2. Indukcija OA sa MIA kod pacova

Životinje su nasumično raspoređene i raspoređene u grupe za tretman prije početka studije (po grupi). MIA rastvor (3 mg/50μL 0,9% fiziološkog rastvora) je direktno ubrizgan u intraartikularni prostor desnog koljena pod anestezijom izazvanom mješavinom ketamina i ksilazina. Pacovi su nasumično podijeljeni u četiri grupe: (1) grupa sa fiziološkim rastvorom bez MIA injekcije, (2) MIA grupa sa MIA injekcijom, (3) grupa tretirana SDE (200 mg/kg) sa MIA injekcijom i (4) grupa tretirana indometacinom (IM) (2 mg/kg) sa MIA injekcijom. Pacovima je oralno davan SDE i IM 1 sedmicu prije MIA injekcije tokom 4 sedmice. Doziranje SDE i IM korišteno u ovoj studiji zasnovano je na dozama korištenim u prethodnim studijama [10,13,14].

2.4.3. Mjerenja raspodjele težine na zadnjim šapama

Nakon indukcije osteoartritisa (OA), prvobitna ravnoteža u sposobnosti nošenja težine zadnjih šapa je bila poremećena. Za procjenu promjena u toleranciji nošenja težine korišten je tester onesposobljenosti (Linton instrumentation, Norfolk, UK). Pacovi su pažljivo smješteni u mjernu komoru. Sila nošenja težine koju vrši zadnji ud usrednjavana je tokom perioda od 3 sekunde. Omjer raspodjele težine izračunat je sljedećom jednačinom: [težina na desnom zadnjem udu/(težina na desnom zadnjem udu + težina na lijevom zadnjem udu)] × 100 [15].

2.4.4. Mjerenja nivoa citokina u serumu

Uzorci krvi su centrifugirani na 1.500 g tokom 10 minuta na 4°C; zatim je serum sakupljen i pohranjen na -70°C do upotrebe. Nivoi IL-1β, IL-6, TNF-α, i PGE2 u serumu su mjereni korištenjem ELISA kompleta od R&D Systems (Minneapolis, MN, SAD) prema uputama proizvođača.

2.4.5. Kvantitativna RT-PCR analiza u realnom vremenu

Ukupna RNK je ekstrahovana iz tkiva koljenog zgloba korištenjem TRI reagensa® (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, SAD), reverzno transkribovana u cDNA i PCR-amplifikovana korištenjem TM One Step RT PCR kita sa SYBR green (Applied Biosystems, Grand Island, NY, SAD). Kvantitativna PCR u realnom vremenu je izvedena korištenjem Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR sistema (Applied Biosystems, Grand Island, NY, SAD). Sekvence primera i sekvenca probe su prikazane u tabeli.1Alikvoti uzoraka cDNK i jednaka količina GAPDH cDNK su amplificirani pomoću TaqMan® Universal PCR master smjese koja sadrži DNK polimerazu prema uputama proizvođača (Applied Biosystems, Foster, CA, SAD). PCR uslovi su bili 2 min na 50°C, 10 min na 94°C, 15 s na 95°C i 1 min na 60°C tokom 40 ciklusa. Koncentracija ciljnog gena je određena korištenjem komparativne Ct metode (broj ciklusa praga na ukrštanju između amplifikacijskog dijagrama i praga), prema uputama proizvođača.

FOB cijena:0,5 - 9.999 USD / komad

Minimalna količina za narudžbu:100 komada/komada

Mogućnost snabdijevanja:10000 komada/komada mjesečno