-
Hladno ceđeno organsko jojobino ulje Noseće ulje jojobe za njegu kože
Glavni sastojci prirodnog ulja jojobe su palmitinska kiselina, eruka kiselina, oleinska kiselina i gadoleinska kiselina. Ulje jojobe je takođe bogato vitaminima poput vitamina E i vitamina B kompleksa.
Tečni biljni vosak biljke jojobe je zlatne boje. Biljno ulje jojobe ima karakterističnu aromu orašastih plodova i poželjan je dodatak proizvodima za ličnu njegu kao što su kreme, šminka, šamponi, itd. Biljno ulje jojobe može se direktno nanositi na kožu za opekotine od sunca, psorijazu i akne. Čisto ulje jojobe također potiče rast kose.
-
Prirodno čisto organsko eterično ulje lavande za aromaterapijsku njegu kože
Ekstrakcija ili metoda obrade: destilirana parom
Destilacija Ekstrakcijski dio: Cvijet
Porijeklo zemlje:Kina
Primjena: Difuzna/aromaterapija/masaža
Rok trajanja: 3 godine
Prilagođena usluga: prilagođena etiketa i kutija ili prema vašim zahtjevima
Certifikacija: GMPC/FDA/ISO9001/MSDS/COA
-
100% čisto prirodno organsko esencijalno ulje magnolije officmalis Cortex za njegu kože
Miris Hou Poa je odmah gorak i oštro oštar, a zatim se postepeno otvara dubokom, sirupastom slatkoćom i toplinom.
Hou Po-ov afinitet je prema Zemlji i metalnim elementima gdje njegova gorka toplina snažno djeluje da spusti Qi i suhu vlagu. Zbog ovih kvaliteta, koristi se u kineskoj medicini za ublažavanje stagnacije i nakupljanja u probavnom traktu, kao i kašlja i zviždanja zbog sluzi koja opstruira pluća.
Magnolia Officinials je listopadno drvo porijeklom iz planina i dolina Sečuana, Hubeija i drugih provincija Kine. Visoko aromatična kora koja se koristi u tradicionalnoj kineskoj medicini skida se sa stabljika, grana i korijena. Sakupljena je tokom aprila do juna. Debela, glatka kora, bogata uljem, ima ljubičastu boju sa unutrašnje strane sa kristalnim sjajem.
Praktičari bi mogli razmisliti o kombinaciji Hou Po sa eteričnim uljem Qing Pi kao vrhunskom komplimentom u mješavinama koje imaju za cilj razbijanje nakupina.
-
OEM prilagođeni paket Prirodno ulje Macrocephalae Rhizoma
Kao efikasno hemoterapeutsko sredstvo, 5-fluorouracil (5-FU) ima široku primenu za lečenje malignih tumora u gastrointestinalnom traktu, glavi, vratu, grudima i jajnicima. A 5-FU je lijek prve linije za kolorektalni karcinom na klinici. Mehanizam djelovanja 5-FU je da blokira transformaciju uracil nukleinske kiseline u timin nukleinsku kiselinu u tumorskim stanicama, zatim utiče na sintezu i popravak DNK i RNA kako bi se postigao njegov citotoksični učinak (Afzal et al., 2009; Ducreux et al. dr., 2015. Longley i dr., 2003.). Međutim, 5-FU također uzrokuje dijareju uzrokovanu kemoterapijom (CID), jednu od najčešćih nuspojava koja muči mnoge pacijente (Filho et al., 2016). Incidencija dijareje kod pacijenata liječenih 5-FU iznosila je do 50% – 80%, što je ozbiljno uticalo na napredak i efikasnost kemoterapije (Iacovelli et al., 2014; Rosenoff et al., 2006). Shodno tome, od velike je važnosti pronaći efikasnu terapiju za CID izazvan 5-FU.
Trenutno su u kliničko liječenje CID-a uvezene ne-lijekove intervencije i intervencije lijekova. Intervencije koje se ne koriste lijekovima uključuju razumnu ishranu i dodatke soli, šećerom i drugim nutrijentima. Lijekovi kao što su loperamid i oktreotid se obično koriste u terapiji CID protiv dijareje (Benson et al., 2004). Osim toga, etnomedicini su također usvojeni za liječenje CID-a svojom vlastitom jedinstvenom terapijom u raznim zemljama. Tradicionalna kineska medicina (TCM) je jedna tipična etnomedicina koja se prakticira više od 2000 godina u istočnoazijskim zemljama uključujući Kinu, Japan i Koreju (Qi et al., 2010). TCM smatra da bi kemoterapeutski lijekovi izazvali konzumaciju Qi-ja, nedostatak slezene, nesklad u želucu i endofitsku vlagu, što bi rezultiralo provodljivom disfunkcijom crijeva. U teoriji TCM, strategija liječenja CID-a treba uglavnom ovisiti o dopuni Qi-a i jačanju slezine (Wang et al., 1994).
Osušeni korijeniAtractylodes macrocephalaKoidz. (AM) iPanax ginsengCA Mey. (PG) su tipični biljni lijekovi u TKM-u sa istim efektima dodavanja Qi-ja i jačanja slezene (Li et al., 2014.). AM i PG se obično koriste kao biljni par (najjednostavniji oblik kineske kompatibilnosti biljaka) sa efektima dodavanja Qi-ja i jačanja slezene za liječenje dijareje. Na primjer, AM i PG su dokumentirani u klasičnim formulama protiv dijareje kao što su Shen Ling Bai Zhu San, Si Jun Zi Tang izTaiping Huimin Heji Ju Fang(dinastija Song, Kina) i Bu Zhong Yi Qi Tang izPi Wei Lun(Dinastija Yuan, Kina) (Sl. 1). Nekoliko prethodnih studija je izvijestilo da sve tri formule posjeduju sposobnost ublažavanja CID-a (Bai et al., 2017.; Chen et al., 2019.; Gou et al., 2016.). Pored toga, naša prethodna studija je pokazala da Shenzhu kapsule koje sadrže samo AM i PG imaju potencijalne efekte na tretmane dijareje, kolitisa (xiexie sindrom) i drugih gastrointestinalnih bolesti (Feng et al., 2018). Međutim, nijedna studija nije raspravljala o učinku i mehanizmu AM i PG u liječenju CID-a, bilo u kombinaciji ili samostalno.
Sada se smatra da je crijevna mikrobiota potencijalni faktor u razumijevanju terapijskog mehanizma TCM (Feng et al., 2019). Moderne studije pokazuju da mikrobiota crijeva igra ključnu ulogu u održavanju crijevne homeostaze. Zdrava mikrobiota crijeva doprinosi zaštiti crijevne sluznice, metabolizmu, imunološkoj homeostazi i odgovoru te supresiji patogena (Thursby i Juge, 2017; Pickard et al., 2017). Poremećena mikrobiota crijeva direktno ili indirektno narušava fiziološke i imunološke funkcije ljudskog tijela, izazivajući nuspojave poput dijareje (Patel i sur., 2016; Zhao i Shen, 2010). Istraživanja su pokazala da je 5-FU značajno promijenio strukturu crijevne mikrobiote kod miševa s dijarejom (Li et al., 2017). Stoga, efekti AM i PM na dijareju izazvanu 5-FU mogu biti posredovani crijevnom mikrobiotom. Međutim, još uvijek nije poznato da li AM i PG sami i u kombinaciji mogu spriječiti dijareju izazvanu 5-FU modulacijom crijevne mikrobiote.
Da bismo istražili efekte protiv dijareje i osnovni mehanizam AM i PG, koristili smo 5-FU za simulaciju modela dijareje kod miševa. Ovdje smo se fokusirali na potencijalne efekte pojedinačne i kombinovane primjene (AP).Atractylodes macrocephalaeterično ulje (AMO) iPanax ginsengukupni saponini (PGS), aktivne komponente ekstrahirane iz AM i PG, na dijareju, crijevnu patologiju i mikrobnu strukturu nakon 5-FU kemoterapije.
-
100% čisto prirodno eterično ulje Eucommiae Foliuml za njegu kože
Eucommia ulmoides(EU) (na kineskom jeziku obično nazvan "Du Zhong") pripadaju porodici Eucommiaceae, rodu malog drveta porijeklom iz Centralne Kine [1]. Ova biljka se široko uzgaja u Kini u velikim razmjerima zbog svoje medicinske važnosti. Iz EU je izolovano oko 112 spojeva koji uključuju lignane, iridoide, fenole, steroide i druge spojeve. Komplementarna biljna formula ove biljke (kao što je ukusni čaj) pokazala je neka ljekovita svojstva. List EU ima veću aktivnost vezanu za korteks, cvijet i plod [2,3]. Prijavljeno je da lišće EU povećava snagu kostiju i tjelesnih mišića [4], što dovodi do dugovječnosti i promicanja plodnosti kod ljudi [5]. Za ukusnu formulu čaja napravljenu od lista EU se navodi da smanjuje masnoću i poboljšava energetski metabolizam. Prijavljeno je da flavonoidna jedinjenja (kao što su rutin, hlorogenska kiselina, ferulna kiselina i kafeinska kiselina) pokazuju antioksidativnu aktivnost u listovima EU [6].
Iako postoji dovoljno literature o fitokemijskim svojstvima EU, postoji nekoliko studija o farmakološkim svojstvima različitih jedinjenja ekstrahovanih iz kore, sjemena, stabljike i lišća EU. Ovaj pregledni rad će razjasniti detaljne informacije o različitim jedinjenjima ekstrahiranim iz različitih dijelova (kora, sjemenke, stabljike i listovi) EU i buduću upotrebu ovih jedinjenja u svojstvima promicanja zdravlja uz naučne dokaze i na taj način pružiti referentni materijal za primjenu EU.
-
Čisto prirodno ulje Houttuynia cordata Ulje Houttuynia Cordata Lchthammolum Oil
U većini zemalja u razvoju, 70-95% stanovništva oslanja se na tradicionalne lijekove za primarnu zdravstvenu zaštitu, a od ovih 85% ljudi koristi biljke ili njihove ekstrakte kao aktivnu supstancu.1] Potraga za novim biološki aktivnim spojevima iz biljaka obično ovisi o specifičnim etničkim i narodnim informacijama dobivenim od lokalnih praktičara i još uvijek se smatra važnim izvorom za otkrivanje lijekova. U Indiji je oko 2000 lijekova biljnog porijekla.2] S obzirom na širok interes za korištenje ljekovitog bilja, ovaj prikaz oHouttuynia cordataThunb. pruža ažurne informacije o botaničkim, komercijalnim, etnofarmakološkim, fitokemijskim i farmakološkim studijama koje se pojavljuju u literaturi.H. cordataThunb. pripada porodiciSaururaceaei obično je poznat kao kineski rep guštera. To je višegodišnja biljka sa stolonifernim rizomom koji ima dva različita hemotipa.3,4] Kineski hemotip ove vrste nalazi se u divljim i poludivljim uslovima na severoistoku Indije od aprila do septembra.5,6,7]H. cordataje dostupan u Indiji, posebno u dolini Brahmaputra u Assamu i koriste ga različita plemena Asama u obliku povrća, kao i tradicionalno u različite medicinske svrhe.
-
100% PureArctium lappa ulje Proizvođač – prirodno vapno Arctium lappa ulje sa certifikatima osiguranja kvalitete
Zdravstvene prednosti
Korijen čička se često jede, ali se također može osušiti i umočiti u čaj. Djeluje dobro kao izvor inulina, aprebiotikvlakna koja pospješuju probavu i poboljšavaju zdravlje crijeva. Osim toga, ovaj korijen sadrži flavonoide (hranjive tvari biljaka),fitokemikalijei antioksidansi za koje je poznato da imaju zdravstvene prednosti.
Osim toga, korijen čička može pružiti i druge prednosti kao što su:
Smanjite hroničnu upalu Korijen čička sadrži brojne antioksidanse, kao što su kvercetin, fenolne kiseline i luteolin, koji mogu pomoći u zaštiti vaših stanica odslobodni radikali. Ovi antioksidansi pomažu u smanjenju upale u cijelom tijelu.
Zdravstveni rizici
Koren čička se smatra sigurnim za jelo ili piće kao čaj. Međutim, ova biljka vrlo podsjeća na biljke velebilje belladonne, koje su otrovne. Preporučuje se da korijen čička kupujete samo od provjerenih prodavača i da se suzdržite od samostalnog sakupljanja. Osim toga, postoje minimalne informacije o njegovim učincima na djecu ili trudnice. Razgovarajte sa svojim lekarom pre upotrebe korena čička kod dece ili ako ste trudni.
Evo nekih drugih mogućih zdravstvenih rizika koje treba uzeti u obzir ako koristite korijen čička:
Povećana dehidracija
Korijen čička djeluje kao prirodni diuretik, što može dovesti do dehidracije. Ako uzimate tablete za vodu ili druge diuretike, ne biste trebali uzimati korijen čička. Ako uzimate ove lijekove, važno je biti svjestan drugih lijekova, biljaka i sastojaka koji mogu dovesti do dehidracije.
Alergijska reakcija
Ako ste osjetljivi ili ste ranije imali alergijske reakcije na tratinčice, ambroziju ili krizanteme, imate povećan rizik od alergijske reakcije na korijen čička.
-
Veleprodajna cijena na veliko 100% čista AsariRadix Et Rhizoma ulje Relax Aromatherapy Eucalyptus globulus
Studije na životinjama i in vitro istraživale su potencijalne antifungalne, protuupalne i kardiovaskularne učinke sasafrasa i njegovih komponenti. Međutim, nedostaju klinička ispitivanja, a sassafras se ne smatra sigurnim za upotrebu. Safrol, glavni sastojak kore i ulja korijena sasafrasa, zabranjen je od strane američke Uprave za hranu i lijekove (FDA), uključujući upotrebu kao aroma ili miris, i ne bi se trebao koristiti interno ili eksterno, jer je potencijalno kancerogen. Safrol se koristio u ilegalnoj proizvodnji 3,4-metilen-dioksimetamfetamina (MDMA), poznatog i pod uličnim nazivima "ecstasy" ili "Molly", a prodaju safrola i ulja sasafrasa prati američka Uprava za borbu protiv droga.
-
Veleprodajna cijena na veliko 100% čisto eterično ulje Stellariae Radix (novo) Relax Aromatherapy Eucalyptus globulus
Kineska farmakopeja (izdanje 2020.) zahtijeva da metanolni ekstrakt YCH ne smije biti manji od 20,0% [2], bez specificiranih drugih indikatora evaluacije kvaliteta. Rezultati ovog istraživanja pokazuju da sadržaj metanolnih ekstrakata u divljim i kultivisanim uzorcima zadovoljava standard farmakopeje, te da među njima nije bilo značajne razlike. Dakle, nije bilo vidljive razlike u kvalitetu između divljih i kultiviranih uzoraka, prema tom indeksu. Međutim, sadržaj ukupnih sterola i ukupnih flavonoida u divljim uzorcima bio je značajno veći od onih u kultivisanim uzorcima. Daljnja metabolomska analiza otkrila je veliku raznolikost metabolita između divljih i kultiviranih uzoraka. Dodatno, 97 značajno različitih metabolita je skrinirano, koji su navedeni uDodatna tabela S2. Među ovim značajno različitim metabolitima su β-sitosterol (ID je M397T42) i derivati kvercetina (M447T204_2), za koje se navodi da su aktivni sastojci. Ranije neprijavljeni sastojci, kao što su trigonelin (M138T291_2), betain (M118T277_2), fustin (M269T36), rotenon (M241T189), arktiin (M557T165) i loganska kiselina (M399T165), takođe su uključeni među različiti metabolit28. Ove komponente igraju različite uloge u antioksidaciji, protiv upale, uklanjanju slobodnih radikala, protiv raka i liječenju ateroskleroze i stoga mogu predstavljati potencijalne nove aktivne komponente u YCH. Sadržaj aktivnih sastojaka određuje efikasnost i kvalitet ljekovitog materijala [7]. Ukratko, metanolni ekstrakt kao jedini indeks evaluacije kvaliteta YCH ima neka ograničenja, a specifičnije markere kvaliteta treba dalje istražiti. Postojale su značajne razlike u ukupnim sterolima, ukupnim flavonoidima i sadržaju mnogih drugih diferencijalnih metabolita između divljeg i kultiviranog YCH; tako da su potencijalno postojale neke razlike u kvalitetu među njima. Istovremeno, novootkriveni potencijalni aktivni sastojci u YCH mogu imati važnu referentnu vrijednost za proučavanje funkcionalne osnove YCH i daljnji razvoj YCH resursa.
Važnost pravog ljekovitog materijala odavno je prepoznata u specifičnoj regiji porijekla za proizvodnju kineskih biljnih lijekova odličnog kvaliteta [8]. Visok kvalitet je bitan atribut pravih medicinskih materijala, a stanište je važan faktor koji utiče na kvalitet takvih materijala. Otkako se YCH počeo koristiti kao lijek, dugo je dominirao divlji YCH. Nakon uspješnog uvođenja i pripitomljavanja YCH u Ningxiji 1980-ih, izvor Yinchaihu ljekovitog materijala postupno je prešao sa divljeg na kultivirani YCH. Prema prethodnoj istrazi o YCH izvorima [9] i terenskim istraživanjem naše istraživačke grupe, postoje značajne razlike u području rasprostranjenosti uzgojenog i divljeg ljekovitog materijala. Divlji YCH je uglavnom rasprostranjen u autonomnoj regiji Ningxia Hui u provinciji Shaanxi, u blizini sušne zone Unutrašnje Mongolije i centralne Ningxie. Konkretno, pustinjska stepa u ovim područjima je najpogodnije stanište za rast YCH. Nasuprot tome, kultivirani YCH se uglavnom distribuira na jugu divljeg područja distribucije, kao što je okrug Tongxin (kultiviran I) i okolna područja, koja je postala najveća baza za uzgoj i proizvodnju u Kini, i Pengyang County (kultivirana II) , koji se nalazi u južnijem području i predstavlja još jedno proizvodno područje za uzgoj YCH. Štaviše, staništa ova dva kultivisana područja nisu pustinjske stepe. Stoga, osim u načinu proizvodnje, postoje i značajne razlike u staništu divljeg i kultiviranog YCH. Stanište je važan faktor koji utiče na kvalitet biljnih ljekovitih materijala. Različita staništa će utjecati na stvaranje i nakupljanje sekundarnih metabolita u biljkama, a samim tim i na kvalitetu lijekova [10,11]. Dakle, značajne razlike u sadržaju ukupnih flavonoida i ukupnih sterola i ekspresiji 53 metabolita koje smo pronašli u ovoj studiji mogu biti rezultat upravljanja terenima i razlika u staništu.Jedan od glavnih načina na koji okoliš utječe na kvalitetu ljekovitog materijala je stres na izvorne biljke. Umjereni stres iz okoline ima tendenciju da stimulira nakupljanje sekundarnih metabolita [12,13]. Hipoteza ravnoteže rasta/diferencijacije kaže da, kada su hranjive tvari u dovoljnoj količini, biljke prvenstveno rastu, dok kada su hranjive tvari manjkave, biljke se uglavnom diferenciraju i proizvode više sekundarnih metabolita [14]. Stres od suše uzrokovan nedostatkom vode glavni je ekološki stres s kojim se suočavaju biljke u sušnim područjima. U ovoj studiji, stanje vode uzgojenog YCH je obilnije, sa godišnjim nivoom padavina značajno višim od onih za divlji YCH (snabdijevanje vodom za kultivisano I bilo je oko 2 puta veće od divljeg; kultivirano II bilo je oko 3,5 puta veće od divljeg ). Osim toga, tlo u divljini je pjeskovito tlo, ali tlo u poljoprivrednom zemljištu je glineno tlo. U poređenju sa glinom, peskovito zemljište ima lošu sposobnost zadržavanja vode i veća je verovatnoća da će pogoršati stres od suše. Istovremeno, proces uzgoja je često bio praćen zalivanjem, pa je stepen stresa od suše bio nizak. Divlji YCH raste u surovim prirodnim sušnim staništima i stoga može pretrpjeti ozbiljniji stres od suše.Osmoregulacija je važan fiziološki mehanizam pomoću kojeg se biljke nose sa stresom od suše, a alkaloidi su važni osmotski regulatori u višim biljkama [15]. Betaini su vodotopivi alkaloidi kvaternarnog amonijaka i mogu djelovati kao osmoprotektori. Stres od suše može smanjiti osmotski potencijal stanica, dok osmoprotektori čuvaju i održavaju strukturu i integritet bioloških makromolekula, te učinkovito ublažavaju štetu uzrokovanu stresom od suše biljkama [16]. Na primjer, pod stresom suše, sadržaj betaina u šećernoj repi i Lycium barbarum značajno se povećao [17,18]. Trigonelin je regulator rasta ćelija, a pod stresom od suše, može produžiti dužinu biljnog ćelijskog ciklusa, inhibirati rast ćelija i dovesti do smanjenja volumena ćelije. Relativno povećanje koncentracije otopljene tvari u ćeliji omogućava biljci da postigne osmotsku regulaciju i poboljša svoju sposobnost da se odupre stresu od suše [19]. JIA X [20] otkrio je da, s povećanjem stresa od suše, Astragalus membranaceus (izvor tradicionalne kineske medicine) proizvodi više trigonelina, koji djeluje na regulaciju osmotskog potencijala i poboljšava sposobnost otpora na stres od suše. Također se pokazalo da flavonoidi igraju važnu ulogu u otpornosti biljaka na stres od suše [21,22]. Veliki broj studija je potvrdio da je umjeren stres od suše bio pogodan za nakupljanje flavonoida. Lang Duo-Yong et al. [23] uporedio je efekte stresa od suše na YCH kontrolom kapaciteta zadržavanja vode na terenu. Utvrđeno je da stres od suše u određenoj mjeri inhibira rast korijena, ali kod umjerenog i jakog stresa od suše (40% poljskog kapaciteta zadržavanja vode) ukupni sadržaj flavonoida u YCH raste. U međuvremenu, pod stresom od suše, fitosteroli mogu djelovati tako da regulišu fluidnost i propusnost ćelijske membrane, inhibiraju gubitak vode i poboljšaju otpornost na stres [24,25]. Stoga, povećana akumulacija ukupnih flavonoida, ukupnih sterola, betaina, trigonelina i drugih sekundarnih metabolita u divljem YCH može biti povezana sa stresom od suše visokog intenziteta.U ovoj studiji, analiza obogaćivanja KEGG puta je izvršena na metabolitima za koje je utvrđeno da se značajno razlikuju između divljeg i kultiviranog YCH. Obogaćeni metaboliti uključivali su one koji su uključeni u puteve metabolizma askorbata i aldarata, biosintezu aminoacil-tRNA, metabolizam histidina i metabolizam beta-alanina. Ovi metabolički putevi su usko povezani sa mehanizmima otpornosti biljaka na stres. Među njima, metabolizam askorbata igra važnu ulogu u proizvodnji biljnih antioksidanata, metabolizmu ugljika i dušika, otpornosti na stres i drugim fiziološkim funkcijama [26]; Biosinteza aminoacil-tRNA je važan put za stvaranje proteina [27,28], koji je uključen u sintezu proteina otpornih na stres. Putevi histidina i β-alanina mogu poboljšati toleranciju biljaka na stres iz okoline [29,30]. Ovo dalje ukazuje da su razlike u metabolitima između divljeg i uzgojenog YCH bile usko povezane s procesima otpornosti na stres.Zemljište je materijalna osnova za rast i razvoj ljekovitog bilja. Azot (N), fosfor (P) i kalij (K) u tlu su važni nutrijenti za rast i razvoj biljaka. Organska tvar tla sadrži i N, P, K, Zn, Ca, Mg i druge makroelemente i elemente u tragovima potrebne za ljekovito bilje. Prekomjerni ili manjkovi nutrijenata, ili neuravnoteženi omjeri hranjivih tvari, utjecat će na rast i razvoj te na kvalitetu ljekovitog materijala, a različite biljke imaju različite potrebe za hranjivim tvarima [31,32,33]. Na primjer, nizak nivo N-a potaknuo je sintezu alkaloida u Isatis indigotica i bio je koristan za akumulaciju flavonoida u biljkama kao što su Tetrastigma hemsleyanum, Crataegus pinnatifida Bunge i Dichondra repens Forst. Nasuprot tome, previše N inhibira akumulaciju flavonoida u vrstama kao što su Erigeron breviscapus, Abrus cantoniensis i Ginkgo biloba, te utječe na kvalitetu ljekovitog materijala [34]. Primena P đubriva je bila efikasna u povećanju sadržaja glicirizinske kiseline i dihidroacetona u uralskom sladića [35]. Kada je količina primjene premašila 0,12 kg·m−2, ukupan sadržaj flavonoida u Tussilago farfara se smanjio [36]. Primjena P gnojiva negativno je utjecala na sadržaj polisaharida u tradicionalnoj kineskoj medicini rhizoma polygonati [37], ali K đubrivo je bilo efikasno u povećanju sadržaja saponina [38]. Primjena gnojiva od 450 kg·hm−2 K bila je najbolja za rast i akumulaciju saponina dvogodišnjeg Panax notoginseng [39]. U odnosu N:P:K = 2:2:1, ukupne količine hidrotermalnog ekstrakta, harpagida i harpagozida bile su najveće [40]. Visok omjer N, P i K bio je koristan za promicanje rasta Pogostemon cablina i povećanje sadržaja hlapljivog ulja. Nizak odnos N, P i K povećao je sadržaj glavnih efikasnih komponenti ulja iz listova Pogostemon cablin [41]. YCH je biljka tolerantna na neplodno tlo i može imati specifične zahtjeve za nutrijentima kao što su N, P i K. U ovoj studiji, u poređenju s kultiviranim YCH, tlo divljih YCH biljaka bilo je relativno neplodno: sadržaj tla organske materije, ukupni N, ukupni P i ukupni K bili su oko 1/10, 1/2, 1/3 i 1/3 u odnosu na kultivisane biljke. Stoga bi razlike u hranjivim tvarima u tlu mogle biti još jedan razlog za razlike između metabolita otkrivenih u kultiviranom i divljem YCH. Weibao Ma i dr. [42] utvrdio da je primena određene količine N i P đubriva značajno poboljšala prinos i kvalitet semena. Međutim, efekat nutrijenata na kvalitet YCH nije jasan, a mjere oplodnje za poboljšanje kvaliteta ljekovitog materijala zahtijevaju daljnje proučavanje.Kineski biljni lijekovi imaju karakteristike „Povoljna staništa podstiču prinos, a nepovoljna staništa poboljšavaju kvalitetu“ [43]. U procesu postepenog prelaska sa divljeg na kultivisani YCH, stanište biljaka se promenilo od sušne i neplodne pustinjske stepe do plodnog poljoprivrednog zemljišta sa obilnijim vodom. Stanište uzgojenog YCH je superiorno i prinos je veći, što pomaže u zadovoljavanju potražnje tržišta. Međutim, ovo superiorno stanište dovelo je do značajnih promjena u metabolitima YCH; da li je ovo pogodno za poboljšanje kvaliteta YCH i kako postići visokokvalitetnu proizvodnju YCH kroz mjere uzgoja zasnovane na nauci zahtijevat će daljnja istraživanja.Simulativna kultivacija staništa je metoda simulacije staništa i uslova okoline divljih ljekovitih biljaka, zasnovana na poznavanju dugotrajne adaptacije biljaka na specifične okolišne stresove [43]. Simulacijom različitih faktora okoliša koji utječu na divlje biljke, posebno na izvorno stanište biljaka koje se koriste kao izvori autentičnih ljekovitih materijala, pristup koristi znanstveni dizajn i inovativnu ljudsku intervenciju kako bi uravnotežio rast i sekundarni metabolizam kineskih ljekovitih biljaka [43]. Metode imaju za cilj postizanje optimalnih aranžmana za razvoj visokokvalitetnih medicinskih materijala. Simulativno uzgajanje staništa trebalo bi da obezbedi efikasan način za visokokvalitetnu proizvodnju YCH čak i kada su farmakodinamička osnova, markeri kvaliteta i mehanizmi odgovora na faktore sredine nejasni. U skladu s tim, predlažemo da se mjere naučnog dizajna i upravljanja terenom u uzgoju i proizvodnji YCH trebaju provoditi s obzirom na ekološke karakteristike divljeg YCH, kao što su uslovi sušnog, neplodnog i pješčanog tla. U isto vrijeme, također se nadamo da će istraživači provesti dublje istraživanje funkcionalne materijalne osnove i markera kvaliteta YCH. Ove studije mogu pružiti efikasnije kriterije evaluacije za YCH i promovirati visokokvalitetnu proizvodnju i održivi razvoj industrije. -
Herbal Fructus Amomi ulje Prirodni difuzori za masažu 1kg Bulk Amomum villosum Eterično ulje
Porodica Zingiberaceae privlači sve veću pažnju u alelopatskim istraživanjima zbog bogatih hlapljivih ulja i aromatičnosti vrsta koje pripadaju. Prethodna istraživanja su pokazala da hemikalije iz Curcuma zedoaria (zedoary) [40], Alpinia zerumbet (Pers.) BLBurtt & RMSm. [41] i Zingiber officinale Rosc. [42] porodice đumbira imaju alelopatsko dejstvo na klijanje semena i rast rasada kukuruza, zelene salate i paradajza. Naša trenutna studija je prvi izvještaj o alelopatskoj aktivnosti hlapljivih tvari iz stabljika, listova i mladih plodova A. villosum (član porodice Zingiberaceae). Prinos ulja u stabljikama, listovima i mladim plodovima bio je 0,15%, 0,40% i 0,50%, respektivno, što ukazuje da plodovi proizvode veću količinu hlapljivih ulja od stabljika i listova. Glavne komponente hlapljivih ulja iz stabljike bile su β-pinen, β-felandren i α-pinen, što je bio obrazac sličan onom kod glavnih hemikalija ulja u listovima, β-pinena i α-pinena (monoterpenski ugljovodonici). S druge strane, ulje u mladim plodovima bilo je bogato bornil acetatom i kamforom (oksigenirani monoterpeni). Rezultati su potkrijepljeni nalazima Do N Daija [30,32] i Hui Ao [31] koji je identificirao ulja iz različitih organa A. villosum.
Bilo je nekoliko izvještaja o inhibitornim aktivnostima ovih glavnih spojeva kod drugih vrsta. Shalinder Kaur je otkrio da α-pinen iz eukaliptusa značajno potiskuje dužinu korijena i visinu izdanaka Amaranthus viridis L. pri koncentraciji od 1,0 μL [43], a druga studija je pokazala da α-pinen inhibira rani rast korijena i uzrokuje oksidativno oštećenje u tkivu korijena povećanjem stvaranja reaktivnih vrsta kisika [44]. Neki izvještaji su tvrdili da β-pinen inhibira klijanje i rast klijanaca testnih korova na način koji ovisi o dozi, narušavajući integritet membrane [45], mijenjajući biljnu biohemiju i pojačavajući aktivnosti peroksidaza i polifenol oksidaza [46]. β-Phellandrene je pokazao maksimalnu inhibiciju klijanja i rasta Vigna unguiculata (L.) Walp u koncentraciji od 600 ppm [47], dok je u koncentraciji od 250 mg/m3 kamfor potisnuo rast korena i izdanaka Lepidium sativum L.48]. Međutim, istraživanja koja izvještavaju o alelopatskom efektu bornil acetata su oskudna. U našem istraživanju, alelopatski efekti β-pinena, bornil acetata i kamfora na dužinu korijena bili su slabiji nego kod hlapljivih ulja osim α-pinena, dok je ulje lista, bogato α-pinenom, također bilo fitotoksičnije od odgovarajućeg hlapljivog ulja. ulja iz stabljika i plodova A. villosum, oba nalaza ukazuju da bi α-pinen mogao biti važna hemikalija za alelopatiju ove vrste. Istovremeno, rezultati su ukazivali i na to da bi neki spojevi u voćnom ulju kojih nije bilo u izobilju mogli doprinijeti stvaranju fitotoksičnog efekta, što je nalaz koji zahtijeva daljnja istraživanja u budućnosti.U normalnim uslovima, alelopatski efekat alelohemikalija je specifičan za vrstu. Jiang et al. otkrili su da eterično ulje koje proizvodi Artemisia sieversiana ima snažniji učinak na Amaranthus retroflexus L. nego na Medicago sativa L., Poa annua L. i Pennisetum alopecuroides (L.) Spreng. [49]. U drugoj studiji, hlapljivo ulje Lavandula angustifolia Mill. proizvele različite stupnjeve fitotoksičnih efekata na različite biljne vrste. Lolium multiflorum Lam. je bila najosjetljivija vrsta akceptora, rast hipokotila i radikula je bio inhibiran za 87,8% odnosno 76,7%, respektivno, pri dozi od 1 μL/mL ulja, ali je rast hipokotila sadnica krastavca bio jedva pogođen [20]. Naši rezultati su također pokazali da postoji razlika u osjetljivosti na A. villosum volatiles između L. sativa i L. perenne.Hlapljiva jedinjenja i eterična ulja iste vrste mogu varirati kvantitativno i/ili kvalitativno zbog uslova rasta, delova biljaka i metoda detekcije. Na primjer, izvještaj je pokazao da su piranoid (10,3%) i β-kariofilen (6,6%) glavna jedinjenja isparljivih materija koje se emituju iz listova Sambucus nigra, dok su benzaldehid (17,8%), α-bulnesen (16,6%) i tetrakozan (11,5%) bilo je u izobilju u uljima ekstrahovanim iz listova [50]. U našem istraživanju, hlapljiva jedinjenja koja oslobađaju svježi biljni materijali imala su jače alelopatsko djelovanje na ispitivane biljke nego ekstrahirana hlapljiva ulja, pri čemu su razlike u odgovoru usko povezane s razlikama u alelokemikalijama prisutnim u ova dva preparata. Točne razlike između hlapljivih spojeva i ulja potrebno je dalje istražiti u narednim eksperimentima.Razlike u mikrobnoj raznolikosti i strukturi mikrobne zajednice u uzorcima tla kojima su dodana hlapljiva ulja odnose se na konkurenciju među mikroorganizmima, kao i na bilo kakve toksične efekte i trajanje isparljivih ulja u tlu. Vokou i Liotiri [51] je otkrio da je odgovarajuća primjena četiri eterična ulja (0,1 mL) na kultivirano tlo (150 g) aktivirala disanje uzoraka tla, čak su se i ulja razlikovala po svom hemijskom sastavu, što sugerira da se biljna ulja koriste kao ugljik i izvor energije od strane prisutni mikroorganizmi u tlu. Podaci dobijeni iz tekuće studije potvrdili su da su ulja iz cijele biljke A. villosum doprinijela očiglednom povećanju broja zemljišnih gljivičnih vrsta do 14. dana nakon dodavanja ulja, što ukazuje da ulje može biti izvor ugljika za više gljive tla. Druga studija je objavila nalaz: mikroorganizmi u tlu su povratili svoju početnu funkciju i biomasu nakon privremenog perioda varijacije izazvanog dodatkom ulja Thymbra capitata L. (Cav), ali ulje u najvećoj dozi (0,93 µL ulja po gramu tla) nisu dozvolili mikroorganizmima u tlu da povrate početnu funkcionalnost [52]. U trenutnoj studiji, na osnovu mikrobiološke analize tla nakon tretiranja različitim danima i koncentracijama, nagađali smo da će se bakterijska zajednica tla oporaviti nakon više dana. Nasuprot tome, gljivična mikrobiota se ne može vratiti u prvobitno stanje. Sljedeći rezultati potvrđuju ovu hipotezu: jasan učinak visoke koncentracije ulja na sastav gljivičnog mikrobioma tla otkriven je analizom glavnih koordinata (PCoA), a prezentacije toplinske karte još jednom su potvrdile da sastav gljivične zajednice tla tretirana sa 3,0 mg/mL ulja (odnosno 0,375 mg ulja po gramu zemlje) na nivou roda značajno se razlikovala od ostalih tretmana. Trenutno su istraživanja o efektima dodavanja monoterpenskih ugljovodonika ili oksigeniranih monoterpena na mikrobnu raznolikost tla i strukturu zajednice još uvijek oskudna. Nekoliko studija je izvijestilo da je α-pinen povećao mikrobnu aktivnost u tlu i relativno obilje Methylophilaceae (grupa metilotrofa, Proteobacteria) pod niskim sadržajem vlage, igrajući važnu ulogu kao izvor ugljika u sušnijim tlima [53]. Slično, isparljivo ulje cijele biljke A. villosum, koje sadrži 15,03% α-pinena (Dodatna tabela S1), očito je povećao relativnu brojnost Proteobacteria na 1,5 mg/mL i 3,0 mg/mL, što sugerira da α-pinen može djelovati kao jedan od izvora ugljika za mikroorganizme u tlu.Hlapljiva jedinjenja proizvedena u različitim organima A. villosum imala su različite stepene alelopatskog dejstva na L. sativa i L. perenne, što je bilo usko povezano sa hemijskim sastojcima koje su sadržavali delovi biljke A. villosum. Iako je potvrđen hemijski sastav hlapljivog ulja, hlapljiva jedinjenja koja oslobađa A. villosum na sobnoj temperaturi su nepoznata, što je potrebno dalje istražiti. Štaviše, vredan je razmatranja i sinergistički efekat između različitih alelohemikalija. Što se tiče mikroorganizama u tlu, da bismo sveobuhvatno istražili učinak hlapljivog ulja na mikroorganizme u tlu, još uvijek moramo provesti dublje istraživanje: produžiti vrijeme tretmana hlapljivog ulja i uočiti varijacije u hemijskom sastavu hlapljivog ulja u tlu. na različite dane. -
Čisto ulje Artemisia capillaris za proizvodnju svijeća i sapuna veleprodajno eterično ulje difuzora novo za difuzore s trskom
Dizajn modela glodara
Životinje su nasumično podijeljene u pet grupa od po petnaest miševa. Miševi kontrolne grupe i grupe modela davani su sa gavažomsusamovo uljeza 6 dana. Miševi pozitivne kontrolne grupe davani su tabletama bifendata (BT, 10 mg/kg) tokom 6 dana. Eksperimentalne grupe su tretirane sa 100 mg/kg i 50 mg/kg AEO rastvorenim u susamovom ulju tokom 6 dana. Šestog dana kontrolna grupa je tretirana susamovim uljem, a sve ostale grupe tretirane su jednom dozom od 0,2% CCl4 u susamovom ulju (10 ml/kg)intraperitonealna injekcija. Miševi su zatim očišćeni od vode, a uzorci krvi su sakupljeni iz retrobulbarnih sudova; prikupljena krv je centrifugirana na 3000 ×g10 min da se serum odvoji.Cervikalna dislokacijaje obavljena odmah nakon vađenja krvi, a uzorci jetre su odmah uklonjeni. Jedan dio uzorka jetre je odmah pohranjen na -20 °C do analize, a drugi dio je izrezan i fiksiran u 10%formalinrješenje; preostala tkiva su pohranjena na -80 °C radi histopatološke analize (Wang et al., 2008,Hsu et al., 2009,Nie et al., 2015).
Mjerenje biohemijskih parametara u serumu
Ozljeda jetre procijenjena je procjenomenzimske aktivnostiserumskih ALT i AST koristeći odgovarajuće komercijalne komplete prema uputama za komplete (Nanjing, provincija Jiangsu, Kina). Enzimske aktivnosti su izražene u jedinicama po litru (U/l).
Mjerenje MDA, SOD, GSH i GSH-Pxu homogenatima jetre
Tkiva jetre su homogenizovana hladnim fiziološkim rastvorom u omjeru 1:9 (w/v, jetra:fiziološki rastvor). Homogenati su centrifugirani (2500 ×g10 min) da se sakupe supernatanti za naknadna određivanja. Oštećenje jetre je procenjeno na osnovu hepatičkih merenja nivoa MDA i GSH, kao i SOD i GSH-Pxaktivnosti. Sve je to određeno prema uputama na kompletu (Nanjing, provincija Jiangsu, Kina). Rezultati za MDA i GSH izraženi su kao nmol po mg proteina (nmol/mg prot), a aktivnosti SOD i GSH-Pxsu izražene kao U po mg proteina (U/mg proteina).
Histopatološka analiza
Delovi sveže dobijene jetre su fiksirani u 10% puferuparaformaldehidrastvor fosfata. Uzorak je zatim umetnut u parafin, narezan na dijelove od 3-5 μm, obojenhematoksilinieozin(H&E) prema standardnoj proceduri, a na kraju analizira odsvetlosna mikroskopija(Tian et al., 2012).
Statistička analiza
Rezultati su izraženi kao srednja vrijednost ± standardna devijacija (SD). Rezultati su analizirani pomoću statističkog programa SPSS Statistics, verzija 19.0. Podaci su podvrgnuti analizi varijanse (ANOVA,p< 0,05) nakon čega slijede Dunnettov test i Dunnettov T3 test kako bi se utvrdile statistički značajne razlike između vrijednosti različitih eksperimentalnih grupa. Značajna razlika je razmatrana na nivou odp< 0,05.
Rezultati i diskusija
Sastojci AEO
Nakon GC/MS analize, utvrđeno je da AEO sadrži 25 sastojaka eluiranih od 10 do 35 minuta, a identificiran je 21 sastojak koji čini 84% eteričnog ulja (Tabela 1). Isparljivo ulje koje sadržimonoterpenoidi(80,9%), seskviterpenoidi (9,5%), zasićeni nerazgranati ugljovodonici (4,86%) i razni acetilen (4,86%). U poređenju sa drugim studijama (Guo et al., 2004), pronašli smo obilje monoterpenoida (80,90%) u AEO. Rezultati su pokazali da je najzastupljeniji sastojak AEO β-citronelol (16,23%). Ostale glavne komponente AEO uključuju 1,8-cineol (13,9%),kamfor(12,59%),linalool(11,33%), α-pinen (7,21%), β-pinen (3,99%),timol(3,22%) imyrcene(2,02%). Varijacije u hemijskom sastavu mogu biti povezane sa uslovima životne sredine kojima je biljka bila izložena, kao što su mineralna voda, sunčeva svetlost, faza razvoja iishrana.
-
Čisto ulje Saposhnikovia divaricata za proizvodnju svijeća i sapuna veleprodajno eterično ulje difuzora novo za difuzore s trskom
2.1. Priprema SDE
Rizomi SD su kupljeni kao sušena biljka od Hanherb Co. (Guri, Koreja). Biljni materijal je taksonomski potvrdio dr. Go-Ya Choi sa Korejskog instituta za orijentalnu medicinu (KIOM). Uzorak vaučera (broj 2014 SDE-6) deponovan je u Korejski herbarijum standardnih biljnih resursa. Osušeni rizomi SD (320 g) ekstrahovani su dva puta sa 70% etanolom (sa refluksom od 2 sata) i ekstrakt je zatim koncentrisan pod sniženim pritiskom. Dekocija je filtrirana, liofilizirana i čuvana na 4°C. Prinos osušenog ekstrakta iz sirovih polaznih materijala iznosio je 48,13% (w/w).
2.2. Kvantitativna tečna hromatografija visokih performansi (HPLC) analiza
Kromatografska analiza je izvedena sa HPLC sistemom (Waters Co., Milford, MA, USA) i detektorom fotodiodnog niza. Za HPLC analizu SDE, prim-O-glukozilcimifugin standard je kupljen od Korea Promotion Institute for Traditional Medicine Industry (Gyeongsan, Koreja), isec-O-glukozilamaudol i 4′-O-β-D-glukozil-5-O-metilvisaminol izolovani su u našoj laboratoriji i identifikovani spektralnim analizama, prvenstveno NMR i MS.
SDE uzorci (0,1 mg) rastvoreni su u 70% etanolu (10 mL). Kromatografsko odvajanje je izvedeno sa XSelect HSS T3 C18 kolonom (4,6 × 250 mm, 5μm, Waters Co., Milford, MA, SAD). Mobilna faza se sastojala od acetonitrila (A) i 0,1% sirćetne kiseline u vodi (B) pri brzini protoka od 1,0 mL/min. Korišten je višestepeni program gradijenta na sljedeći način: 5% A (0 min), 5–20% A (0–10 min), 20% A (10–23 min) i 20–65% A (23–40 min ). Talasna dužina detekcije je skenirana na 210–400 nm i snimljena na 254 nm. Zapremina injekcije je bila 10,0μL. Standardni rastvori za određivanje tri hromona pripremljeni su u konačnoj koncentraciji od 7,781 mg/mL (prim-O-glukozilcimifugin), 31,125 mg/mL (4′-O-β-D-glukozil-5-O-metilvisaminol) i 31,125 mg/mL (sec-O-glukozilhamaudol) u metanolu i čuva se na 4°C.
2.3. Evaluacija antiinflamatorne aktivnostiIn Vitro
2.3.1. Ćelijska kultura i tretman uzoraka
RAW 264,7 ćelije su dobijene iz American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, SAD) i uzgajane u DMEM medijumu koji sadrži 1% antibiotika i 5,5% FBS. Ćelije su inkubirane u vlažnoj atmosferi od 5% CO2 na 37°C. Da bi se stimulirale ćelije, medij je zamijenjen svježim DMEM medijumom i lipopolisaharidom (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, USA) na 1μg/mL je dodan u prisustvu ili odsustvu SDE (200 ili 400μg/mL) dodatnih 24 h.
2.3.2. Određivanje azotnog oksida (NO), prostaglandina E2 (PGE2), faktora tumorske nekroze-α(TNF-α), i proizvodnja interleukina-6 (IL-6).
Ćelije su tretirane sa SDE i stimulisane sa LPS tokom 24 h. Proizvodnja NO analizirana je mjerenjem nitrita korištenjem Griessovog reagensa prema prethodnoj studiji [12]. Lučenje inflamatornih citokina PGE2, TNF-α, a IL-6 je određen korištenjem ELISA kompleta (R&D sistemi) prema uputama proizvođača. Efekti SDE na proizvodnju NO i citokina određeni su na 540 nm ili 450 nm koristeći Wallac EnVision™čitač mikropločica (PerkinElmer).
2.4. Evaluacija antiosteoartritisne aktivnostiIn Vivo
2.4.1. Životinje
Mužjaci Sprague-Dawley pacova (stari 7 sedmica) kupljeni su od Samtako Inc. (Osan, Koreja) i smješteni u kontroliranim uvjetima sa 12-satnim ciklusom svjetlo/mrak na°C i% vlažnosti. Pacovi su dobili laboratorijsku ishranu i voduad libitum. Sve eksperimentalne procedure izvedene su u skladu sa smjernicama Nacionalnog instituta za zdravlje (NIH) i odobrene od strane Komiteta za njegu i korištenje životinja na univerzitetu Daejeon (Daejeon, Republika Koreja).
2.4.2. Indukcija OA sa MIA kod pacova
Životinje su randomizirane i raspoređene u tretirane grupe prije početka studije (po grupi). MIA rastvor (3 mg/50μL 0,9% fiziološkog rastvora) direktno je ubrizgan u intraartikularni prostor desnog kolena pod anestezijom indukovanom mešavinom ketamina i ksilazina. Štakori su nasumično podijeljeni u četiri grupe: (1) grupa fiziološkog rastvora bez injekcije MIA, (2) grupa MIA sa injekcijom MIA, (3) grupa tretirana SDE (200 mg/kg) sa injekcijom MIA i (4 ) grupa tretirana indometacinom (IM-) (2 mg/kg) sa injekcijom MIA. Pacovima je davan oralno sa SDE i IM 1 nedelju pre injekcije MIA tokom 4 nedelje. Doze SDE i IM korištene u ovoj studiji bile su zasnovane na onima korištenim u prethodnim studijama [10,13,14].
2.4.3. Mjerenja distribucije težine stražnje šape
Nakon indukcije OA, prvobitna ravnoteža u podnošenju težine stražnjih šapa je poremećena. Tester nesposobnosti (Linton instrumentation, Norfolk, UK) korišten je za procjenu promjena u toleranciji na nosivost. Pacovi su pažljivo stavljeni u mernu komoru. Sila nošenja težine koju vrši stražnji ekstremitet je prosječna u periodu od 3 s. Omjer raspodjele težine izračunat je sljedećom jednadžbom: [težina na desnom stražnjem ekstremitetu/(težina na desnom stražnjem ekstremitetu + težina na lijevom stražnjem udu)] × 100 [15].
2.4.4. Mjerenje nivoa citokina u serumu
Uzorci krvi su centrifugirani na 1500 g tokom 10 minuta na 4°C; zatim je serum sakupljen i čuvan na -70°C do upotrebe. Nivoi IL-1β, IL-6, TNF-α, i PGE2 u serumu mjereni su korištenjem ELISA kompleta od R&D Systems (Minneapolis, MN, SAD) prema uputama proizvođača.
2.4.5. Kvantitativna RT-PCR analiza u realnom vremenu
Ukupna RNK je ekstrahirana iz tkiva zgloba koljena pomoću TRI reagensa® (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA), reverzno transkribirana u cDNK i PCR-amplificirana korištenjem TM One Step RT PCR kita sa SYBR zelenom (Applied Biosystems , Grand Island, NY, SAD). Kvantitativna PCR u realnom vremenu izvedena je pomoću Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR sistema (Applied Biosystems, Grand Island, NY, USA). Sekvence prajmera i sekvence sonde prikazane su u tabeli1. Alikvoti uzorka cDNK i jednaka količina GAPDH cDNK su amplificirani TaqMan® Universal PCR master mješavinom koja sadrži DNK polimerazu prema uputama proizvođača (Applied Biosystems, Foster, Kalifornija, SAD). PCR uslovi su bili 2 min na 50°C, 10 min na 94°C, 15 s na 95°C i 1 min na 60°C tokom 40 ciklusa. Koncentracija ciljnog gena određena je uporednom metodom Ct (broj ciklusa praga na tački križanja između grafikona amplifikacije i praga), prema uputama proizvođača.
