-
Aromaterapija Čisto prirodno eterično ulje lista eukaliptusa za njegu kože tijela
Metoda ekstrakcije ili obrade: destilacija parom
Dio za ekstrakciju destilacije: list
Zemlja porijekla: Kina
Primjena: Difuzno/aromaterapija/masaža
Rok trajanja: 3 godine
Prilagođena usluga: prilagođena etiketa i kutija ili prema vašem zahtjevu
Certifikacija: GMPC/FDA/ISO9001/MSDS/COA
Ulje eukaliptusa reaguje sa sluzi i razrjeđuje je kako bi pružilo trenutno olakšanje od nedostatka daha i drugih respiratornih problema. Dovoljno je snažno da djeluje kao repelent protiv insekata. Kada se koristi u aromaterapiji, pruža jasnoću misli. Njegove terapeutske koristi su zbog antimikrobnih, antibakterijskih, antiseptičkih, antispazmodičnih i antivirusnih svojstava. Koristite ulje eukaliptusa protiv raznih kožnih i zdravstvenih problema. Sadrži eukaliptol, koji je također poznat kao cineol. Ovaj spoj će podržati vaše cjelokupno zdravlje i dobrobit.
-
Prirodno čisto organsko eterično ulje lavande za aromaterapijsku njegu kože
Metoda ekstrakcije ili obrade: Destilacija parom
Dio za ekstrakciju destilacije: Cvijet
Zemlja porijekla: Kina
Primjena: Difuzno/aromaterapija/masaža
Rok trajanja: 3 godine
Prilagođena usluga: prilagođena etiketa i kutija ili prema vašem zahtjevu
Certifikacija: GMPC/FDA/ISO9001/MSDS/COA
-
100% čisto prirodno organsko eterično ulje Magnoliae Officmalis Cortex za njegu kože
Miris Hou Poa je odmah gorak i oštro oštar, a zatim se postepeno otvara dubokom, sirupastom slatkoćom i toplinom.
Hou Po ima afinitet prema elementima Zemlje i Metala, gdje njegova gorka toplina snažno djeluje na spuštanje Qi energije i suhu vlagu. Zbog ovih svojstava, koristi se u kineskoj medicini za ublažavanje stagnacije i nakupljanja u probavnom traktu, kao i kašljanja i zviždanja uslijed sluzi koja začepljuje pluća.
Magnolia Officinials je listopadno drvo porijeklom iz planina i dolina Sečuana, Hubeija i drugih kineskih provincija. Visoko aromatična kora koja se koristi u tradicionalnoj kineskoj medicini ljušti se sa stabljika, grana i korijenja i sakuplja se tokom aprila do juna. Debela, glatka kora, bogata uljem, ima ljubičastu boju s unutrašnje strane i kristalni sjaj.
Praktičari mogu razmotriti kombinovanje Hou Po-a sa eteričnim uljem Qing Pi kao dodatak gornjoj noti u mješavinama usmjerenim na razbijanje nakupina.
-
OEM prilagođeni paket Prirodno ulje rizoma makrocefalae
Kao efikasno hemoterapeutsko sredstvo, 5-fluorouracil (5-FU) se široko primjenjuje za liječenje malignih tumora u gastrointestinalnom traktu, glavi, vratu, grudnom košu i jajnicima. 5-FU je lijek prve linije za kolorektalni karcinom u kliničkoj praksi. Mehanizam djelovanja 5-FU je blokiranje transformacije nukleinske kiseline uracila u nukleinsku kiselinu timina u tumorskim ćelijama, a zatim utjecaj na sintezu i popravak DNK i RNK kako bi se postigao njegov citotoksični učinak (Afzal et al., 2009; Ducreux et al., 2015; Longley et al., 2003). Međutim, 5-FU također izaziva dijareju izazvanu hemoterapijom (CID), jednu od najčešćih nuspojava koje muče mnoge pacijente (Filho et al., 2016). Učestalost dijareje kod pacijenata liječenih 5-FU iznosila je do 50%-80%, što je ozbiljno utjecalo na napredak i efikasnost hemoterapije (Iacovelli et al., 2014; Rosenoff et al., 2006). Shodno tome, od velike je važnosti pronaći efikasnu terapiju za CID izazvanu 5-FU.
Trenutno su u klinički tretman CID-a uvezene intervencije bez lijekova i intervencije s lijekovima. Intervencije bez lijekova uključuju razumnu prehranu i suplementaciju soli, šećerom i drugim hranjivim tvarima. Lijekovi poput loperamida i oktreotida često se koriste u terapiji protiv proljeva kod CID-a (Benson et al., 2004). Osim toga, etnomedicina se također usvaja za liječenje CID-a sa svojom jedinstvenom terapijom u raznim zemljama. Tradicionalna kineska medicina (TCM) je tipična etnomedicina koja se primjenjuje više od 2000 godina u istočnoazijskim zemljama, uključujući Kinu, Japan i Koreju (Qi et al., 2010). TCM smatra da hemoterapijski lijekovi mogu izazvati potrošnju Qi-ja, nedostatak slezene, disharmoniju želuca i endofitsku vlažnost, što rezultira provodnom disfunkcijom crijeva. U teoriji TCM-a, strategija liječenja CID-a trebala bi se uglavnom oslanjati na suplementaciju Qi-ja i jačanje slezene (Wang et al., 1994).
Osušeni korijeni odAtractylodes macrocephalaKoidz. (AM) iPanax ginsengCA Mey. (PG) su tipični biljni lijekovi u tradicionalnoj kineskoj medicini (TCM) s istim efektima suplementacije Qi-ja i jačanja slezene (Li et al., 2014). AM i PG se obično koriste kao par biljaka (najjednostavniji oblik kompatibilnosti s kineskim biljem) s efektima suplementacije Qi-ja i jačanja slezene za liječenje dijareje. Na primjer, AM i PG su dokumentovani u klasičnim formulama protiv dijareje kao što su Shen Ling Bai Zhu San, Si Jun Zi Tang izTaiping Huimin Heji Ju Fang(dinastija Song, Kina) i Bu Zhong Yi Qi Tang izPi Wei Lun(Dinastija Yuan, Kina) (Sl. 1). Nekoliko prethodnih studija je izvijestilo da sve tri formule posjeduju sposobnost ublažavanja CID-a (Bai et al., 2017; Chen et al., 2019; Gou et al., 2016). Osim toga, naša prethodna studija je pokazala da Shenzhu kapsule, koje sadrže samo AM i PG, imaju potencijalne učinke na liječenje dijareje, kolitisa (xiexie sindroma) i drugih gastrointestinalnih bolesti (Feng et al., 2018). Međutim, nijedna studija nije razmatrala učinak i mehanizam AM i PG u liječenju CID-a, bilo u kombinaciji ili samostalno.
Sada se crijevna mikrobiota smatra potencijalnim faktorom u razumijevanju terapijskog mehanizma tradicionalne kineske medicine (TCM) (Feng et al., 2019). Moderne studije pokazuju da crijevna mikrobiota igra ključnu ulogu u održavanju crijevne homeostaze. Zdrava crijevna mikrobiota doprinosi zaštiti crijevne sluznice, metabolizmu, imunološkoj homeostazi i odgovoru, te suzbijanju patogena (Thursby i Juge, 2017; Pickard et al., 2017). Poremećena crijevna mikrobiota direktno ili indirektno narušava fiziološke i imunološke funkcije ljudskog tijela, izazivajući nuspojave poput dijareje (Patel et al., 2016; Zhao i Shen, 2010). Istraživanja su pokazala da 5-FU značajno mijenja strukturu crijevne mikrobiote kod miševa s dijarejom (Li et al., 2017). Stoga, efekti AM i PM na dijareju izazvanu 5-FU mogu biti posredovani crijevnom mikrobiotom. Međutim, još uvijek nije poznato da li AM i PG sami ili u kombinaciji mogu spriječiti dijareju izazvanu 5-FU moduliranjem crijevne mikrobiote.
Kako bismo istražili efekte protiv dijareje i osnovni mehanizam djelovanja AM i PG, koristili smo 5-FU za simulaciju modela dijareje kod miševa. Ovdje smo se fokusirali na potencijalne efekte pojedinačne i kombinovane primjene (AP)Atractylodes macrocephalaeterično ulje (AMO) iPanax ginsengukupni saponini (PGS), aktivne komponente ekstrahovane iz AM i PG, na dijareju, crijevnu patologiju i mikrobnu strukturu nakon kemoterapije 5-FU.
-
100% čisto prirodno eterično ulje Eucommiae Foliuml za njegu kože
Eucommia ulmoides(EU) (u kineskom jeziku se obično naziva „Du Zhong“) pripada porodici Eucommiaceae, rodu malog drveta porijeklom iz centralne Kine [1]. Ova biljka se široko uzgaja u Kini zbog svog ljekovitog značaja. Iz EU je izolirano oko 112 spojeva, uključujući lignane, iridoide, fenole, steroide i druge spojeve. Komplementarna formula bilja ove biljke (kao što je ukusni čaj) pokazala je neka ljekovita svojstva. List EU ima veću aktivnost u odnosu na korteks, cvijet i plod [2,3]. Prijavljeno je da listovi EU poboljšavaju snagu kostiju i tjelesnih mišića [4], što dovodi do dugovječnosti i potiče plodnost kod ljudi [5]. Prijavljeno je da ukusna formula čaja napravljena od lista EU smanjuje masnoću i poboljšava energetski metabolizam. Prijavljeno je da flavonoidni spojevi (kao što su rutin, hlorogena kiselina, ferulinska kiselina i kofeinska kiselina) pokazuju antioksidativno djelovanje u listovima EU [6].
Iako postoji dovoljno literature o fitokemijskih svojstava EU, postoji malo studija o farmakološkim svojstvima različitih spojeva ekstrahiranih iz kore, sjemenki, stabljika i listova EU. Ovaj pregledni rad će objasniti detaljne informacije o različitim spojevima ekstrahiranim iz različitih dijelova (kore, sjemenki, stabljike i lista) EU i potencijalnoj upotrebi ovih spojeva u svojstvima koja promovišu zdravlje, uz naučne dokaze, te na taj način pružiti referentni materijal za primjenu EU.
-
Čisto prirodno ulje Houttuynia cordata, ulje Houttuynia cordata, ulje Lchthammolum
U većini zemalja u razvoju, 70-95% stanovništva oslanja se na tradicionalne lijekove za primarnu zdravstvenu zaštitu, a od njih 85% ljudi koristi biljke ili njihove ekstrakte kao aktivnu supstancu.1Potraga za novim biološki aktivnim spojevima iz biljaka obično zavisi od specifičnih etničkih i narodnih informacija dobijenih od lokalnih praktičara i još uvijek se smatra važnim izvorom za otkrivanje lijekova. U Indiji, otprilike 2000 lijekova je biljnog porijekla.2S obzirom na široko rasprostranjeno interesovanje za upotrebu ljekovitog bilja, ovaj pregled oHouttuynia cordataThunb. pruža ažurne informacije s referencom na botaničke, komercijalne, etnofarmakološke, fitokemijske i farmakološke studije koje se pojavljuju u literaturi.H. cordataThunb. pripada porodiciSaururaceaei obično je poznat kao rep kineskog guštera. To je višegodišnja biljka sa stolonifernim rizomom koja ima dva različita kemotipa.[3,4Kineski kemotip vrste se nalazi u divljim i poludivljim uslovima na sjeveroistoku Indije od aprila do septembra.5,6,7]H. cordataDostupan je u Indiji, posebno u dolini Brahmaputra u Assamu, a tradicionalno ga koriste razna plemena Assama u obliku povrća, kao i u razne ljekovite svrhe.
-
100% čisto ulje Arctium lappa Proizvođač – Prirodno ulje Arctium lappa od limete sa certifikatima o osiguranju kvalitete
Zdravstvene koristi
Korijen čička se često jede, ali se može i osušiti i namakati u čaju. Dobro služi kao izvor inulina,prebiotikvlakna koja pomažu probavi i poboljšavaju zdravlje crijeva. Osim toga, ovaj korijen sadrži flavonoide (biljne hranjive tvari),fitokemikalije, i antioksidanse za koje se zna da imaju zdravstvene prednosti.
Osim toga, korijen čička može pružiti i druge koristi kao što su:
Smanjite hroničnu upalu Korijen čička sadrži brojne antioksidanse, poput kvercetina, fenolnih kiselina i luteolina, koji mogu pomoći u zaštiti vaših ćelija odslobodni radikaliOvi antioksidansi pomažu u smanjenju upale u cijelom tijelu.
Zdravstveni rizici
Korijen čička se smatra sigurnim za jelo ili piće kao čaj. Međutim, ova biljka veoma podsjeća na biljku velebilje (beladonna), koja je otrovna. Preporučuje se kupovina korijena čička samo od pouzdanih prodavača i izbjegavanje samostalnog branja. Osim toga, postoje minimalne informacije o njegovim efektima kod djece ili trudnica. Razgovarajte sa svojim ljekarom prije upotrebe korijena čička kod djece ili ako ste trudni.
Evo još nekih mogućih zdravstvenih rizika koje treba uzeti u obzir ako koristite korijen čička:
Povećana dehidracija
Korijen čička djeluje kao prirodni diuretik, što može dovesti do dehidracije. Ako uzimate tablete za izbacivanje vode ili druge diuretike, ne biste trebali uzimati korijen čička. Ako uzimate ove lijekove, važno je biti svjestan drugih lijekova, biljaka i sastojaka koji mogu dovesti do dehidracije.
Alergijska reakcija
Ako ste osjetljivi ili imate historiju alergijskih reakcija na tratinčice, ambroziju ili krizanteme, imate povećan rizik od alergijske reakcije na korijen čička.
-
Veleprodajna cijena 100% čistog ulja AsariRadix Et Rhizoma Relax Aromatherapy Eucalyptus globulus
Studije na životinjama i in vitro studije istraživale su potencijalne antifungalne, protuupalne i kardiovaskularne efekte sasafrasa i njegovih komponenti. Međutim, klinička ispitivanja nedostaju, a sasafras se ne smatra sigurnim za upotrebu. Safrol, glavni sastojak kore i ulja korijena sasafrasa, zabranjen je od strane Američke agencije za hranu i lijekove (FDA), uključujući i upotrebu kao aroma ili miris, te se ne smije koristiti interno ili eksterno, jer je potencijalno kancerogen. Safrol se koristi u ilegalnoj proizvodnji 3,4-metilen-dioksimetamfetamina (MDMA), poznatog i pod uličnim nazivima "ecstasy" ili "Molly", a prodaju safrola i ulja sasafrasa prati Američka agencija za suzbijanje droga.
-
Veleprodajna cijena 100% čisto eterično ulje Stellariae Radix (novo) Opuštajuća aromaterapija Eukaliptus globulus
Kineska farmakopeja (izdanje iz 2020.) zahtijeva da metanolni ekstrakt YCH ne smije biti manji od 20,0% [2], bez specificiranih drugih pokazatelja ocjenjivanja kvalitete. Rezultati ove studije pokazuju da je sadržaj metanolnih ekstrakata divljih i kultiviranih uzoraka ispunjavao farmakopejske standarde i da među njima nije bilo značajne razlike. Stoga, prema tom indeksu, nije bilo očigledne razlike u kvaliteti između divljih i kultiviranih uzoraka. Međutim, sadržaj ukupnih sterola i ukupnih flavonoida u divljim uzorcima bio je značajno veći od sadržaja u kultiviranim uzorcima. Daljnja metabolomska analiza otkrila je veliku raznolikost metabolita između divljih i kultiviranih uzoraka. Osim toga, isključeno je 97 značajno različitih metabolita, koji su navedeni uDodatna tabela S2Među ovim značajno različitim metabolitima su β-sitosterol (ID je M397T42) i derivati kvercetina (M447T204_2), za koje je navedeno da su aktivni sastojci. Ranije neprijavljeni sastojci, kao što su trigonelin (M138T291_2), betain (M118T277_2), fustin (M269T36), rotenon (M241T189), arktiin (M557T165) i loganična kiselina (M399T284_2), također su uključeni među diferencijalne metabolite. Ove komponente igraju različite uloge u antioksidaciji, protuupalnom djelovanju, uklanjanju slobodnih radikala, antikancerogenom djelovanju i liječenju ateroskleroze te bi stoga mogle predstavljati pretpostavljene nove aktivne komponente u YCH. Sadržaj aktivnih sastojaka određuje efikasnost i kvalitet ljekovitih materijala [7]. Ukratko, metanolni ekstrakt kao jedini indeks za procjenu kvalitete YCH-a ima neka ograničenja, a specifičnije markere kvalitete potrebno je dalje istražiti. Postojale su značajne razlike u ukupnim sterolima, ukupnim flavonoidima i sadržaju mnogih drugih diferencijalnih metabolita između divljeg i kultiviranog YCH-a; stoga su potencijalno postojale neke razlike u kvaliteti između njih. Istovremeno, novootkriveni potencijalni aktivni sastojci u YCH-u mogli bi imati važnu referentnu vrijednost za proučavanje funkcionalne osnove YCH-a i daljnji razvoj YCH resursa.
Važnost autentičnih ljekovitih materijala odavno je prepoznata u specifičnoj regiji porijekla za proizvodnju kineskih biljnih lijekova odličnog kvaliteta [8]. Visoka kvaliteta je bitna karakteristika pravih ljekovitih materijala, a stanište je važan faktor koji utiče na kvalitet takvih materijala. Otkako se YCH počeo koristiti kao lijek, dugo je dominirao divlji YCH. Nakon uspješnog uvođenja i domestikacije YCH u Ningxiji 1980-ih, izvor ljekovitih materijala Yinchaihu postepeno se prebacio s divljeg na kultivirani YCH. Prema prethodnom istraživanju izvora YCH [9] i terenskim istraživanjem naše istraživačke grupe, postoje značajne razlike u područjima rasprostranjenosti kultiviranog i divljeg ljekovitog materijala. Divlji YCH je uglavnom rasprostranjen u autonomnoj regiji Ningxia Hui u provinciji Shaanxi, uz aridnu zonu Unutrašnje Mongolije i centralne Ningxije. Posebno, pustinjska stepa u ovim područjima je najpogodnije stanište za rast YCH. Nasuprot tome, kultivirani YCH je uglavnom rasprostranjen južno od područja divljeg rasprostranjenja, kao što je okrug Tongxin (kultivirani I) i okolna područja, koji je postao najveća baza za uzgoj i proizvodnju u Kini, i okrug Pengyang (kultivirani II), koji se nalazi u južnijem području i još jedno je područje proizvodnje kultiviranog YCH. Štaviše, staništa gore navedena dva kultivirana područja nisu pustinjska stepa. Stoga, pored načina proizvodnje, postoje i značajne razlike u staništu divljeg i kultiviranog YCH. Stanište je važan faktor koji utiče na kvalitet biljnih ljekovitih materijala. Različita staništa će uticati na formiranje i akumulaciju sekundarnih metabolita u biljkama, što će uticati na kvalitet lekovitih proizvoda [10,11Stoga, značajne razlike u sadržaju ukupnih flavonoida i ukupnih sterola te ekspresiji 53 metabolita koje smo pronašli u ovoj studiji mogle bi biti rezultat upravljanja poljima i razlika u staništima.Jedan od glavnih načina na koji okolina utiče na kvalitet lekovitog materijala jeste vršenje stresa na izvorne biljke. Umereni stres iz okoline obično stimuliše akumulaciju sekundarnih metabolita [12,13]. Hipoteza o ravnoteži rasta/diferencijacije tvrdi da, kada su hranjive tvari u dovoljnoj količini, biljke prvenstveno rastu, dok kada su hranjive tvari u nedostatku, biljke se uglavnom diferenciraju i proizvode više sekundarnih metabolita [14]. Stres suše uzrokovan nedostatkom vode glavni je okolišni stres s kojim se suočavaju biljke u sušnim područjima. U ovoj studiji, stanje vode kod kultiviranog YCH-a je obilnije, s godišnjim nivoima padavina znatno većim od onih kod divljeg YCH-a (opskrba vodom za kultivirani I bila je oko 2 puta veća nego kod divljeg; kultivirani II bila je oko 3,5 puta veća nego kod divljeg). Osim toga, tlo u divljem okruženju je pjeskovito tlo, ali tlo na poljoprivrednom zemljištu je glinovito. U usporedbi s glinom, pjeskovito tlo ima slab kapacitet zadržavanja vode i vjerojatnije je da će pogoršati stres od suše. Istovremeno, proces uzgoja često je bio praćen zalijevanjem, tako da je stupanj stresa od suše bio nizak. Divlji YCH raste u surovim prirodnim sušnim staništima i stoga može patiti od ozbiljnijeg stresa od suše.Osmoregulacija je važan fiziološki mehanizam kojim se biljke nose sa stresom suše, a alkaloidi su važni osmotski regulatori kod viših biljaka [15Betaini su vodotopivi alkaloidni kvaternarni amonijevi spojevi i mogu djelovati kao osmoprotektanti. Stres suše može smanjiti osmotski potencijal ćelija, dok osmoprotektanti čuvaju i održavaju strukturu i integritet bioloških makromolekula i efikasno ublažavaju štetu koju stres suše uzrokuje biljkama [16]. Na primjer, pod stresom suše, sadržaj betaina u šećernoj repi i Lycium barbarum značajno se povećao [17,18Trigonelin je regulator rasta ćelija, a pod stresom suše može produžiti dužinu ćelijskog ciklusa biljke, inhibirati rast ćelija i dovesti do smanjenja volumena ćelija. Relativno povećanje koncentracije rastvorenih materija u ćeliji omogućava biljci da postigne osmotsku regulaciju i poboljša svoju sposobnost da se odupre stresu suše [19]. JIA X [20] otkrili su da, s povećanjem stresa uzrokovanog sušom, Astragalus membranaceus (izvor tradicionalne kineske medicine) proizvodi više trigonelina, koji djeluje na regulaciju osmotičkog potencijala i poboljšanje sposobnosti otpornosti na stres uzrokovan sušom. Također je dokazano da flavonoidi igraju važnu ulogu u otpornosti biljaka na stres uzrokovan sušom [21,22]. Veliki broj studija potvrdio je da je umjereni stres uzrokovan sušom pogodovao akumulaciji flavonoida. Lang Duo-Yong i dr. [23] uporedili su efekte stresa suše na YCH kontrolisanjem kapaciteta zadržavanja vode u polju. Utvrđeno je da stres suše do određene mjere inhibira rast korijena, ali kod umjerenog i jakog stresa suše (40% kapaciteta zadržavanja vode u polju), ukupni sadržaj flavonoida u YCH se povećao. U međuvremenu, pod stresom suše, fitosteroli mogu djelovati na regulaciju fluidnosti i propusnosti ćelijske membrane, inhibirati gubitak vode i poboljšati otpornost na stres [24,25Stoga bi povećana akumulacija ukupnih flavonoida, ukupnih sterola, betaina, trigonelina i drugih sekundarnih metabolita kod divljeg YCH mogla biti povezana sa stresom suše visokog intenziteta.U ovoj studiji, analiza obogaćivanja KEGG puta provedena je na metabolitima za koje je utvrđeno da se značajno razlikuju između divljeg i kultiviranog YCH. Obogaćeni metaboliti uključivali su one koji su uključeni u puteve metabolizma askorbata i aldarata, biosintezu aminoacil-tRNA, metabolizam histidina i metabolizam beta-alanina. Ovi metabolički putevi su usko povezani s mehanizmima otpornosti biljaka na stres. Među njima, metabolizam askorbata igra važnu ulogu u proizvodnji biljnih antioksidansa, metabolizmu ugljika i dušika, otpornosti na stres i drugim fiziološkim funkcijama [26]; biosinteza aminoacil-tRNA je važan put za formiranje proteina [27,28], koji je uključen u sintezu proteina otpornih na stres. I histidinski i β-alaninski putevi mogu poboljšati toleranciju biljaka na stres iz okoliša [29,30]. Ovo dalje ukazuje na to da su razlike u metabolitima između divljeg i kultiviranog YCH bile usko povezane s procesima otpornosti na stres.Tlo je materijalna osnova za rast i razvoj ljekovitih biljaka. Dušik (N), fosfor (P) i kalij (K) u tlu su važni hranjivi elementi za rast i razvoj biljaka. Organska tvar tla također sadrži N, P, K, Zn, Ca, Mg i druge makroelemente i elemente u tragovima potrebne za ljekovite biljke. Prekomjerni ili nedostatni hranjivi sastojci, ili neuravnoteženi omjeri hranjivih tvari, utjecat će na rast i razvoj te kvalitetu ljekovitog materijala, a različite biljke imaju različite potrebe za hranjivim tvarima [31,32,33]. Na primjer, nizak nivo N stresa je podstakao sintezu alkaloida kod Isatis indigotica i bio je koristan za akumulaciju flavonoida u biljkama kao što su Tetrastigma hemsleyanum, Crataegus pinnatifida Bunge i Dichondra repens Forst. Nasuprot tome, previše N je inhibiralo akumulaciju flavonoida kod vrsta kao što su Erigeron breviscapus, Abrus cantoniensis i Ginkgo biloba, te je uticalo na kvalitet ljekovitih materijala [34]. Primjena fosfornog gnojiva bila je učinkovita u povećanju sadržaja glicirizinske kiseline i dihidroacetona u uralskom sladu [35]. Kada je primijenjena količina premašila 0,12 kg·m−2, ukupni sadržaj flavonoida u Tussilago farfara se smanjio [36]. Primjena fosfornog gnojiva negativno je utjecala na sadržaj polisaharida u tradicionalnoj kineskoj medicini, vrsti rhizoma polygonati [37], ali je K gnojivo bilo učinkovito u povećanju sadržaja saponina [38]. Primjena 450 kg·hm−2 K gnojiva bila je najbolja za rast i akumulaciju saponina kod dvogodišnje biljke Panax notoginseng [39]. Pri omjeru N:P:K = 2:2:1, ukupne količine hidrotermalnog ekstrakta, harpagida i harpagozida bile su najveće [40Visok omjer N, P i K bio je koristan za podsticanje rasta Pogostemon cablin i povećanje sadržaja hlapljivog ulja. Nizak omjer N, P i K povećao je sadržaj glavnih učinkovitih komponenti ulja stabljike lista Pogostemon cablin [41]. YCH je biljka otporna na neplodno tlo i možda ima specifične zahtjeve za hranjivim tvarima poput N, P i K. U ovoj studiji, u poređenju s kultiviranim YCH, tlo divljih biljaka YCH bilo je relativno neplodno: sadržaj organske tvari u tlu, ukupni N, ukupni P i ukupni K bili su oko 1/10, 1/2, 1/3 i 1/3 sadržaja kultiviranih biljaka. Stoga bi razlike u hranjivim tvarima u tlu mogle biti još jedan razlog za razlike između metabolita otkrivenih u kultiviranom i divljem YCH. Weibao Ma et al. [42] utvrdili su da primjena određene količine N gnojiva i P gnojiva značajno poboljšava prinos i kvalitet sjemena. Međutim, utjecaj hranjivih elemenata na kvalitet YCH nije jasan, a mjere gnojidbe za poboljšanje kvaliteta ljekovitog materijala zahtijevaju daljnja istraživanja.Kineski biljni lijekovi imaju karakteristike „Povoljna staništa potiču prinos, a nepovoljna staništa poboljšavaju kvalitet“ [43U procesu postepenog prelaska s divljeg na kultivirani YCH, stanište biljaka se promijenilo iz sušne i neplodne pustinjske stepe u plodno poljoprivredno zemljište s obilnijim vodama. Stanište kultiviranog YCH je superiornije, a prinos veći, što je korisno za zadovoljavanje tržišne potražnje. Međutim, ovo superiorno stanište dovelo je do značajnih promjena u metabolitima YCH; da li ovo pogoduje poboljšanju kvalitete YCH i kako postići visokokvalitetnu proizvodnju YCH putem naučno utemeljenih mjera uzgoja zahtijevat će daljnja istraživanja.Simulativni uzgoj staništa je metoda simuliranja staništa i uvjeta okoline divljih ljekovitih biljaka, zasnovana na poznavanju dugoročne adaptacije biljaka na specifične okolišne stresove [43Simuliranjem različitih faktora okoline koji utiču na divlje biljke, posebno na originalno stanište biljaka koje se koriste kao izvori autentičnih ljekovitih materijala, pristup koristi naučni dizajn i inovativnu ljudsku intervenciju kako bi uravnotežio rast i sekundarni metabolizam kineskih ljekovitih biljaka [43]. Metode imaju za cilj postizanje optimalnih aranžmana za razvoj visokokvalitetnih ljekovitih materijala. Simulativni uzgoj staništa trebao bi osigurati efikasan način za visokokvalitetnu proizvodnju YCH čak i kada su farmakodinamička osnova, markeri kvalitete i mehanizmi odgovora na faktore okoliša nejasni. Shodno tome, predlažemo da se naučni dizajn i mjere upravljanja poljem u uzgoju i proizvodnji YCH provode uzimajući u obzir karakteristike okoliša divljeg YCH, kao što su sušni, neplodni i pjeskoviti uvjeti tla. Istovremeno, nadamo se da će istraživači provesti detaljnija istraživanja o funkcionalnoj materijalnoj osnovi i markerima kvalitete YCH. Ove studije mogu pružiti efikasnije kriterije za procjenu YCH i promovirati visokokvalitetnu proizvodnju i održivi razvoj industrije. -
Biljno ulje Fructus Amomi Prirodni difuzori za masažu 1kg u rinfuzi Eterično ulje Amomum villosum
Porodica Zingiberaceae privlači sve veću pažnju u alelopatnim istraživanjima zbog bogatstva isparljivim uljima i aromatičnosti svojih vrsta. Prethodna istraživanja su pokazala da hemikalije iz Curcuma zedoaria (zedoary) [40], Alpinia zerumbet (Pers.) BLBurtt & RMSm. [41] i Zingiber officinale Rosc. [42] iz porodice đumbira imaju alelopatne efekte na klijanje sjemena i rast sadnica kukuruza, salate i paradajza. Naša trenutna studija je prvi izvještaj o alelopatnoj aktivnosti hlapljivih supstanci iz stabljika, listova i mladih plodova A. villosum (član porodice Zingiberaceae). Prinos ulja iz stabljika, listova i mladih plodova bio je 0,15%, 0,40% i 0,50%, respektivno, što ukazuje na to da su plodovi proizvodili veću količinu hlapljivih ulja od stabljika i listova. Glavne komponente hlapljivih ulja iz stabljika bile su β-pinen, β-felandren i α-pinen, što je bio obrazac sličan onome kod glavnih hemikalija ulja lista, β-pinena i α-pinena (monoterpenski ugljikovodici). S druge strane, ulje u mladim plodovima bilo je bogato bornil acetatom i kamforom (oksigenirani monoterpeni). Rezultate su podržali nalazi Do N Daija [30,32] i Hui Ao [31] koji su identificirali ulja iz različitih organa A. villosum.
Postoji nekoliko izvještaja o inhibitornim aktivnostima ovih glavnih spojeva na rast biljaka kod drugih vrsta. Shalinder Kaur je otkrila da α-pinen iz eukaliptusa značajno suzbija dužinu korijena i visinu izdanka Amaranthus viridis L. pri koncentraciji od 1,0 μL [43], a druga studija je pokazala da α-pinen inhibira rani rast korijena i uzrokuje oksidativna oštećenja u tkivu korijena kroz povećano stvaranje reaktivnih vrsta kisika [44]. Neki izvještaji tvrde da je β-pinen inhibirao klijanje i rast sadnica testnih korova na način koji zavisi od doze, narušavajući integritet membrane [45], mijenjajući biohemiju biljaka i pojačavajući aktivnost peroksidaza i polifenol oksidaza [46]. β-Felandren je pokazao maksimalnu inhibiciju klijanja i rasta Vigna unguiculata (L.) Walp pri koncentraciji od 600 ppm [47], dok je, pri koncentraciji od 250 mg/m3, kamfor suzbijao rast radikula i izdanka Lepidium sativum L. [48]. Međutim, istraživanja koja izvještavaju o alelopatnom efektu bornil acetata su oskudna. U našoj studiji, alelopatni efekti β-pinena, bornil acetata i kamfora na dužinu korijena bili su slabiji nego kod isparljivih ulja, osim α-pinena, dok je ulje lista, bogato α-pinenom, također bilo fitotoksičnije od odgovarajućih isparljivih ulja iz stabljika i plodova A. villosum, a oba nalaza ukazuju na to da bi α-pinen mogao biti važna hemikalija za alelopatiju kod ove vrste. Istovremeno, rezultati su također implicirali da neki spojevi u ulju ploda koji nisu bili obilni mogu doprinijeti stvaranju fitotoksičnog efekta, nalaz koji zahtijeva daljnja istraživanja u budućnosti.U normalnim uslovima, alelopatni efekat alelohemikalija je specifičan za vrstu. Jiang i saradnici su otkrili da eterično ulje koje proizvodi Artemisia sieversiana ima snažniji efekat na Amaranthus retroflexus L. nego na Medicago sativa L., Poa annua L. i Pennisetum alopecuroides (L.) Spreng.49U drugoj studiji, isparljivo ulje Lavandula angustifolia Mill. proizvelo je različite stepene fitotoksičnih efekata na različite biljne vrste. Lolium multiflorum Lam. bio je najosjetljivija akceptorska vrsta, rast hipokotila i radikula je inhibiran za 87,8% odnosno 76,7% pri dozi od 1 μL/mL ulja, ali rast hipokotila sadnica krastavca je bio jedva pogođen [20Naši rezultati su također pokazali da postoji razlika u osjetljivosti na isparljive tvari A. villosum između L. sativa i L. perenne.Isparljivi spojevi i eterična ulja iste vrste mogu se kvantitativno i/ili kvalitativno razlikovati zbog uvjeta rasta, dijelova biljke i metoda detekcije. Na primjer, jedan izvještaj je pokazao da su piranoid (10,3%) i β-kariofilen (6,6%) bili glavni spojevi isparljivih tvari koje su emitirali listovi Sambucus nigra, dok su benzaldehid (17,8%), α-bulnesen (16,6%) i tetrakosan (11,5%) bili prisutni u izobilju u uljima ekstrahiranim iz listova [50U našoj studiji, isparljivi spojevi koje oslobađaju svježi biljni materijali imali su jače alelopatne efekte na testne biljke nego ekstrahirana isparljiva ulja, pri čemu su razlike u odgovoru usko povezane s razlikama u alelohemikalijama prisutnim u dva preparata. Tačne razlike između isparljivih spojeva i ulja potrebno je dalje istražiti u narednim eksperimentima.Razlike u mikrobnoj raznolikosti i strukturi mikrobne zajednice u uzorcima tla kojima su dodana isparljiva ulja bile su povezane s konkurencijom među mikroorganizmima, kao i s bilo kakvim toksičnim efektima i trajanjem isparljivih ulja u tlu. Vokou i Liotiri [51] utvrdili su da je primjena četiri eterična ulja (0,1 mL) na obrađeno tlo (150 g) aktivirala disanje uzoraka tla, čak su se i ulja razlikovala po svom hemijskom sastavu, što ukazuje na to da mikroorganizmi u tlu koriste biljna ulja kao izvor ugljika i energije. Podaci dobijeni iz ove studije potvrdili su da su ulja iz cijele biljke A. villosum doprinijela očiglednom povećanju broja vrsta gljivica u tlu do 14. dana nakon dodavanja ulja, što ukazuje na to da ulje može biti izvor ugljika za više gljivica u tlu. Druga studija izvijestila je o nalazu: mikroorganizmi u tlu su oporavili svoju početnu funkciju i biomasu nakon privremenog perioda varijacije izazvanog dodavanjem ulja Thymbra capitata L. (Cav), ali ulje u najvećoj dozi (0,93 µL ulja po gramu tla) nije dozvolilo mikroorganizmima u tlu da oporave početnu funkcionalnost [52]. U trenutnoj studiji, na osnovu mikrobiološke analize tla nakon tretmana različitim danima i koncentracijama, pretpostavili smo da će se zajednica bakterija u tlu oporaviti nakon više dana. Nasuprot tome, gljivična mikrobiota se ne može vratiti u prvobitno stanje. Sljedeći rezultati potvrđuju ovu hipotezu: analiza glavnih koordinata (PCoA) otkrila je izrazit učinak visoke koncentracije ulja na sastav gljivičnog mikrobioma u tlu, a prikazi toplinske mape ponovo su potvrdili da se sastav gljivične zajednice tla tretiranog s 3,0 mg/mL ulja (naime 0,375 mg ulja po gramu tla) na nivou roda znatno razlikuje od ostalih tretmana. Trenutno su istraživanja o efektima dodavanja monoterpenskih ugljikovodika ili oksigeniranih monoterpena na mikrobnu raznolikost tla i strukturu zajednice još uvijek oskudna. Nekoliko studija je izvijestilo da α-pinen povećava aktivnost mikroba u tlu i relativnu brojnost Methylophilaceae (grupa metilotrofa, Proteobacteria) pri niskom sadržaju vlage, igrajući važnu ulogu kao izvor ugljika u sušnijim tlima [53]. Slično tome, isparljivo ulje cijele biljke A. villosum, koje sadrži 15,03% α-pinena (Dodatna tabela S1), očigledno je povećao relativnu brojnost Proteobakterija na 1,5 mg/mL i 3,0 mg/mL, što sugerira da α-pinen moguće djeluje kao jedan od izvora ugljika za mikroorganizme u tlu.Isparljiva jedinjenja koja proizvode različiti organi A. villosum imala su različite stepene alelopatnih efekata na L. sativa i L. perenne, što je bilo blisko povezano sa hemijskim sastojcima koje su sadržavali dijelovi biljke A. villosum. Iako je hemijski sastav isparljivog ulja potvrđen, isparljiva jedinjenja koja oslobađa A. villosum na sobnoj temperaturi nisu poznata, što zahtijeva dalja istraživanja. Štaviše, sinergijski efekat između različitih alelohemikalija također je vrijedan razmatranja. Što se tiče mikroorganizama u zemljištu, da bismo sveobuhvatno istražili uticaj isparljivog ulja na mikroorganizme u zemljištu, i dalje moramo provesti detaljnija istraživanja: produžiti vrijeme tretmana isparljivim uljem i uočiti varijacije u hemijskom sastavu isparljivog ulja u zemljištu tokom različitih dana. -
Čisto ulje Artemisia capillaris za izradu svijeća i sapuna, veleprodaja, difuzor, novo eterično ulje za difuzore s trskom
Dizajn modela glodara
Životinje su nasumično podijeljene u pet grupa od po petnaest miševa. Miševi kontrolne i modelne grupe su primali sondu sasusamovo uljetokom 6 dana. Miševi pozitivne kontrolne grupe su hranjeni tabletama bifendata (BT, 10 mg/kg) tokom 6 dana. Eksperimentalne grupe su tretirane sa 100 mg/kg i 50 mg/kg AEO rastvorenog u sezamovom ulju tokom 6 dana. Šestog dana, kontrolna grupa je tretirana sezamovim uljem, a sve ostale grupe su tretirane jednom dozom 0,2% CCl4 u sezamovom ulju (10 ml/kg) do...intraperitonealna injekcijaMiševi su zatim natašteni i ostavljeni bez vode, a uzorci krvi su uzeti iz retrobulbarnih krvnih sudova; prikupljena krv je centrifugirana pri 3000 ×g10 minuta da se odvoji serum.Dislokacija vratne kralježniceje izvršeno odmah nakon vađenja krvi, a uzorci jetre su odmah uklonjeni. Jedan dio uzorka jetre je odmah pohranjen na -20 °C do analize, a drugi dio je izrezan i fiksiran u 10%formalinrastvor; preostala tkiva su pohranjena na -80 °C za histopatološku analizu (Wang i dr., 2008.,Hsu i dr., 2009.,Nie i dr., 2015.).
Mjerenje biohemijskih parametara u serumu
Oštećenje jetre procijenjeno je procjenomenzimske aktivnostiserumske ALT i AST koristeći odgovarajuće komercijalne kitove prema uputama za kitove (Nanjing, provincija Jiangsu, Kina). Enzimske aktivnosti su izražene u jedinicama po litri (U/l).
Mjerenje MDA, SOD, GSH i GSH-Pxu homogenatima jetre
Tkiva jetre su homogenizirana hladnim fiziološkim rastvorom u omjeru 1:9 (w/v, jetra:fiziološki rastvor). Homogenati su centrifugirani (2500 ×gtokom 10 minuta) kako bi se sakupili supernatanti za naknadna određivanja. Oštećenje jetre procijenjeno je prema mjerenjima nivoa MDA i GSH u jetri, kao i SOD i GSH-P.xaktivnosti. Sve su ove određene prema uputama na kompletu (Nanjing, provincija Jiangsu, Kina). Rezultati za MDA i GSH izraženi su kao nmol po mg proteina (nmol/mg prot), a aktivnosti SOD i GSH-P...xizraženi su kao U po mg proteina (U/mg prot).
Histopatološka analiza
Dijelovi svježe dobivene jetre fiksirani su u 10% puferiranoj sredini.paraformaldehidrastvor fosfata. Uzorak je zatim ugrađen u parafin, isječen na dijelove od 3–5 μm, obojen sahematoksilinieozin(H&E) prema standardnoj proceduri, a na kraju analizirano od stranesvjetlosna mikroskopija(Tian i dr., 2012.).
Statistička analiza
Rezultati su izraženi kao srednja vrijednost ± standardna devijacija (SD). Rezultati su analizirani korištenjem statističkog programa SPSS Statistics, verzija 19.0. Podaci su podvrgnuti analizi varijanse (ANOVA,p< 0,05), nakon čega su korišteni Dunnettov test i Dunnettov T3 test kako bi se utvrdile statistički značajne razlike između vrijednosti različitih eksperimentalnih grupa. Značajna razlika smatrana je na nivoup< 0,05.
Rezultati i diskusija
Sastavni dijelovi AEO-a
Nakon GC/MS analize, utvrđeno je da AEO sadrži 25 sastojaka eluiranih od 10 do 35 minuta, a identificiran je 21 sastojak koji čini 84% esencijalnog ulja (Tabela 1). Isparljivo ulje koje je sadržavalomonoterpenoidi(80,9%), seskviterpenoidi (9,5%), zasićeni nerazgranati ugljikovodici (4,86%) i miješani acetilen (4,86%). U poređenju s drugim studijama (Guo i dr., 2004.), pronašli smo obilne monoterpenoide (80,90%) u AEO. Rezultati su pokazali da je najzastupljeniji sastojak AEO β-citronelol (16,23%). Ostale glavne komponente AEO uključuju 1,8-cineol (13,9%),kamfor(12,59%),linalol(11,33%), α-pinen (7,21%), β-pinen (3,99%),timol(3,22%), imircen(2,02%). Varijacija u hemijskom sastavu može biti povezana sa uslovima okoline kojima je biljka bila izložena, kao što su mineralna voda, sunčeva svjetlost, faza razvoja iishrana.
-
Čisto ulje Saposhnikovia divaricata za izradu svijeća i sapuna, veleprodaja, eterično ulje za difuzore, novo za difuzore s trskom
2.1. Priprema SDE-a
Rizomi SD-a su kupljeni kao sušena biljka od kompanije Hanherb Co. (Guri, Koreja). Biljni materijal je taksonomski potvrdio dr. Go-Ya Choi iz Korejskog instituta za orijentalnu medicinu (KIOM). Uzorak vaučera (broj 2014 SDE-6) je pohranjen u Korejskom herbarijumu standardnih biljnih resursa. Osušeni rizomi SD-a (320 g) su dva puta ekstrahovani sa 70% etanolom (uz 2 sata refluksa), a ekstrakt je zatim koncentrisan pod smanjenim pritiskom. Dekokt je filtriran, liofilizovan i čuvan na 4°C. Prinos osušenog ekstrakta iz sirovih početnih materijala bio je 48,13% (w/w).
2.2. Kvantitativna analiza visokoefikasne tečne hromatografije (HPLC)
Kromatografska analiza je provedena HPLC sistemom (Waters Co., Milford, MA, SAD) i detektorom s fotodiodnim nizom. Za HPLC analizu SDE, primarni...O-standard glukozilcimifugina je kupljen od Korejskog instituta za promociju tradicionalne medicine (Gyeongsan, Koreja), isec-O-glukozilhamaudol i 4′-O-β-D-glukozil-5-O-metilvisaminol su izolovani u našoj laboratoriji i identifikovani spektralnim analizama, prvenstveno NMR i MS.
Uzorci SDE (0,1 mg) su rastvoreni u 70% etanolu (10 mL). Kromatografsko odvajanje je izvršeno pomoću XSelect HSS T3 C18 kolone (4,6 × 250 mm, 5μm, Waters Co., Milford, MA, SAD). Mobilna faza se sastojala od acetonitrila (A) i 0,1% sirćetne kiseline u vodi (B) pri brzini protoka od 1,0 mL/min. Korišten je višestepeni gradijentni program na sljedeći način: 5% A (0 min), 5–20% A (0–10 min), 20% A (10–23 min) i 20–65% A (23–40 min). Talasna dužina detekcije skenirana je na 210–400 nm i snimljena na 254 nm. Volumen injekcije bio je 10,0μL. Standardni rastvori za određivanje tri hromona pripremljeni su u konačnoj koncentraciji od 7,781 mg/mL (prim-O-glukozilcimifugin), 31,125 mg/mL (4′-O-β-D-glukozil-5-O-metilvisaminol) i 31,125 mg/mL (sec-O-glukozilhamaudol) u metanolu i čuvan na 4°C.
2.3. Evaluacija protivupalne aktivnostiIn vitro
2.3.1. Kultura ćelija i tretman uzoraka
RAW 264.7 ćelije su dobijene iz Američke kolekcije tipskih kultura (ATCC, Manassas, VA, SAD) i uzgajane u DMEM medijumu koji sadrži 1% antibiotika i 5,5% FBS. Ćelije su inkubirane u vlažnoj atmosferi od 5% CO2 na 37°C. Da bi se stimulisale ćelije, medijum je zamijenjen svježim DMEM medijumom i lipopolisaharidom (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, SAD) na 1μg/mL je dodat u prisustvu ili odsustvu SDE (200 ili 400μg/mL) tokom dodatnih 24 sata.
2.3.2. Određivanje dušikovog oksida (NO), prostaglandina E2 (PGE2), faktora tumorske nekroze-α(TNF-α) i proizvodnju interleukina-6 (IL-6)
Ćelije su tretirane sa SDE i stimulisane sa LPS tokom 24 sata. Produkcija NO je analizirana mjerenjem nitrita korištenjem Griessovog reagensa prema prethodnoj studiji [12]. Sekrecija inflamatornih citokina PGE2, TNF-α, a IL-6 je određen korištenjem ELISA kita (R&D systems) prema uputama proizvođača. Efekti SDE na proizvodnju NO i citokina određeni su na 540 nm ili 450 nm korištenjem Wallac EnVision uređaja.™čitač mikroploča (PerkinElmer).
2.4. Evaluacija antiosteoartritične aktivnostiIn Vivo
2.4.1. Životinje
Mužjaci pacova Sprague-Dawley (stari 7 sedmica) kupljeni su od Samtako Inc. (Osan, Koreja) i smješteni u kontroliranim uvjetima s 12-satnim ciklusom svjetlosti/tame na°C i% vlažnosti. Pacovima je obezbijeđena laboratorijska ishrana i voda.po voljiSvi eksperimentalni postupci su provedeni u skladu sa smjernicama Nacionalnog instituta za zdravlje (NIH) i odobreni od strane Komiteta za njegu i korištenje životinja Univerziteta Daejeon (Daejeon, Republika Koreja).
2.4.2. Indukcija OA sa MIA kod pacova
Životinje su nasumično raspoređene i raspoređene u grupe za tretman prije početka studije (po grupi). MIA rastvor (3 mg/50μL 0,9% fiziološkog rastvora) je direktno ubrizgan u intraartikularni prostor desnog koljena pod anestezijom izazvanom mješavinom ketamina i ksilazina. Pacovi su nasumično podijeljeni u četiri grupe: (1) grupa sa fiziološkim rastvorom bez MIA injekcije, (2) MIA grupa sa MIA injekcijom, (3) grupa tretirana SDE (200 mg/kg) sa MIA injekcijom i (4) grupa tretirana indometacinom (IM) (2 mg/kg) sa MIA injekcijom. Pacovima je oralno davan SDE i IM 1 sedmicu prije MIA injekcije tokom 4 sedmice. Doziranje SDE i IM korišteno u ovoj studiji zasnovano je na dozama korištenim u prethodnim studijama [10,13,14].
2.4.3. Mjerenja raspodjele težine na zadnjim šapama
Nakon indukcije osteoartritisa (OA), prvobitna ravnoteža u sposobnosti nošenja težine zadnjih šapa je bila poremećena. Za procjenu promjena u toleranciji nošenja težine korišten je tester onesposobljenosti (Linton instrumentation, Norfolk, UK). Pacovi su pažljivo smješteni u mjernu komoru. Sila nošenja težine koju vrši zadnji ud usrednjavana je tokom perioda od 3 sekunde. Omjer raspodjele težine izračunat je sljedećom jednačinom: [težina na desnom zadnjem udu/(težina na desnom zadnjem udu + težina na lijevom zadnjem udu)] × 100 [15].
2.4.4. Mjerenja nivoa citokina u serumu
Uzorci krvi su centrifugirani na 1.500 g tokom 10 minuta na 4°C; zatim je serum sakupljen i pohranjen na -70°C do upotrebe. Nivoi IL-1β, IL-6, TNF-α, i PGE2 u serumu su mjereni korištenjem ELISA kompleta od R&D Systems (Minneapolis, MN, SAD) prema uputama proizvođača.
2.4.5. Kvantitativna RT-PCR analiza u realnom vremenu
Ukupna RNK je ekstrahovana iz tkiva koljenog zgloba korištenjem TRI reagensa® (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, SAD), reverzno transkribovana u cDNA i PCR-amplifikovana korištenjem TM One Step RT PCR kita sa SYBR green (Applied Biosystems, Grand Island, NY, SAD). Kvantitativna PCR u realnom vremenu je izvedena korištenjem Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR sistema (Applied Biosystems, Grand Island, NY, SAD). Sekvence primera i sekvenca probe su prikazane u tabeli.1Alikvoti uzoraka cDNK i jednaka količina GAPDH cDNK su amplificirani pomoću TaqMan® Universal PCR master smjese koja sadrži DNK polimerazu prema uputama proizvođača (Applied Biosystems, Foster, CA, SAD). PCR uslovi su bili 2 min na 50°C, 10 min na 94°C, 15 s na 95°C i 1 min na 60°C tokom 40 ciklusa. Koncentracija ciljnog gena je određena korištenjem komparativne Ct metode (broj ciklusa praga na ukrštanju između amplifikacijskog dijagrama i praga), prema uputama proizvođača.
